（二）功能研究

差异筛选和生物信息分析完成后，需要进一步探究所获得的差异miRNA 的功能和调控机制，外泌体miRNA功能研究主要分为功能获得和功能缺失。其基本研究思路如下。

1.确认外泌体miRNA是否进入受体细胞 通过化学合成带荧光标记的miRNA 模拟物，将其转染进供体细胞，随后收集供体细胞分泌的外泌体，加入受体细胞培养体系中，数小时后通过荧光显微镜或流式细胞仪检查受体细胞是否存在荧光信号，依次判断供体细胞分泌的外泌体miRNA是否进入受体细胞。

2.miRNA对受体细胞表型的影响 在受体细胞中过表达或抑制miRNA 表达及将外泌体与受体细胞共同孵育后，检测对受体细胞生物学功能的影响。主要包括细胞增殖检测、细胞凋亡检测、细胞侵袭和转移检测（划痕实验、Transwell小室法等）几个方面。(https://www.daowen.com)

3.miRNA调控机制研究 包括：①靶基因变化及通路影响；②靶基因对受体细胞表型的影响。可采用实时荧光定量PCR、免疫印迹技术、生物芯片进行检测。

4.体内验证 构建动物模型，对外泌体miRNA功能进行体内水平验证。