DNA片段检测

在细胞凋亡的后期，Caspase会激活Caspase-Activated Dnase（CAD），切割核小体之间的DNA，形成以180～200 bp为单位的DNA片段，经琼脂糖电泳后形成DNA ladder。

1.操作步骤

（1）收集细胞（1×107个细胞），离心沉淀，弃上清液。

（2）加入细胞裂解液，裂解细胞。

（3）13 000 g，离心5 min，收集上清液到1.5 ml离心管。

（4）加1%SDS和RnaseA（5 mg／ml），56℃，孵育2 h。(https://www.daowen.com)

（5）蛋白酶K（2.5 mg／ml）37℃，孵育2 h。

（6）加入1／10体积3 M 醋酸钠（p H 5.2）和2.5倍体积的冷无水乙醇沉淀DNA，4℃过夜。

（7）13 000 g，离心15 min，保留沉淀DNA。

（8）最后将沉淀溶解在TE buffer中，加DNA Loading Buffer。

（9）制备1.2% 琼脂糖凝胶，跑DNA电泳，拍照。

2.注意事项 电泳时一定要注意换用新鲜配制的电泳液，DNA 凝胶也要用新鲜配制的电泳液配制并新鲜配制后使用。电泳时为获取最佳的电泳效果使ladder充分分开，电泳速度宜适当慢一些，凝胶宜适当长一些，而加样孔宜更加扁平一些。选取适当较薄的梳齿，往往会获得更好的ladder电泳效果。