（四）实验步骤
1.台盼蓝染色法
（1）通过胰酶消化（贴壁细胞培养物）并在200 g离心采集细胞，使用适当体积的已预热生长培养基充分重悬细胞，确保使其成为单细胞悬液。
（2）可根据实际情况在1.5 ml EP管中将细胞悬液稀释10倍或20倍，然后加入等体积的0.4%台盼蓝染液，充分混匀后用枪头快速吸取10μl加入到计数板中的小室中，悬液不可溢出到小室外，否则影响小室内的细胞浓度，如果溢出则重新操作。
（3）将计数器置于显微镜下，使用10×物镜和10×目镜计数总细胞数和蓝色细胞数（蓝色）。（4）计算：活细胞比率（%）=（总细胞数-蓝色细胞数）／总细胞数。
2.MTT比色法
（1）收集对数期细胞，以一定细胞密度按每孔100μl铺于96孔平底板中，尽量避免使用边缘孔或用PBS加满边缘孔以防止边缘效应，5%CO2、37℃培养箱培养。
（2）约24 h，细胞铺满孔底，吸掉原培养基，加入梯度浓度的待测药物，每孔100μl，设5～6个副孔，可同时做2～3个96孔板。
（3）正常培养24～48 h，注意观察，记录药物对细胞活性和形态的影响。
（4）24～48 h后，每孔加入10μl MTT溶液，继续培养3～4 h；若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2～3遍后，再加入含MTT的培养液。(https://www.daowen.com)
（5）终止培养，吸掉培养液，每孔加入100μl DMSO，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解后使用酶标仪在OD 550～600 nm 波长处测量各孔的吸光值。
（6）计算每组细胞的增殖率。
3.CCK-8比色法
（1）收集对数期细胞，以一定细胞密度按每孔100μl铺96孔平底板，尽量避免使用边缘孔或用PBS加满边缘孔以防止边缘效应，5%CO2、37℃培养。
（2）约24 h，细胞单层铺满孔底，将药物溶解在培养基中，加入梯度浓度的待测药物，每孔100μl，设5～6个副孔，可同时做3个板。
（3）按实验设计需要培养24～48 h，注意对细胞进行观察，记录药物对细胞活性和形态的影响。
（4）24～48 h后，每孔加入10μl CCK-8溶液，加入的过程中尽量避免产生气泡，因为气泡会影响OD值的读数。继续培养1～4 h。
（5）终止培养，酶标仪450 nm 波长处测量各孔的吸光值。
（6）计算每组细胞的增殖率。