实时荧光定量PCR 的原理及应用

实时荧光定量PCR（real-time quantitative，PCR）技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，（在扩增的指数期）通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析的方法。该技术避免了传统PCR以终产物监测（终点检测）定量产生的偏差，实现了PCR从定性到定量的飞跃，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。已被广泛用于监测细胞mRNA表达量的变化，比较不同组织的mRNA 表达差异，验证基因芯片和siRNA干扰的实验结果等。常用的两种方法为SYBR Green（荧光染料法）和TaqMan probe（荧光探针法）。(https://www.daowen.com)