所需试剂(供参考)
(1)一抗,二抗。
(2)蛋白Marker。
(3)1 M Tris HCl(p H 8.8、p H 6.8)。
(4)10% 十二烷基硫酸钠(SDS)。
(5)30% 聚丙烯酰胺(丙烯酰胺Acr∶甲叉双丙烯酰胺Bis=29∶1)。
(6)10% 过硫酸铵(APS)。
(7)四甲基乙二胺(TEMED)。
(8)吐温-20(Tween-20)。
(9)无水甲醇,无水乙醇。
(10)100 ml RIPA:NaCl 0.88 g,NP-40 1 ml,10%SDS 1 ml,1 M Tris-HCl(p H 7.2)5 ml,0.5 M EDTA(p H 8.0)1 ml,加水溶解至100 ml。
(11)苯甲基磺酰氟(PMSF),以异丙醇或乙醇配制至浓度10 m M。
(12)广谱蛋白酶抑制剂,根据各生产厂家说明要求,加水溶解至合适浓度。(https://www.daowen.com)
(13)5×上样缓冲液(LB)10 ml:2 M Tris-HCl(p H 6.8)1.56 ml,SDS 1 g,丙三醇(Glycerol)5 ml,二硫苏糖醇(DTT)0.12 g,β-巯基乙醇(β-mercaptoehanol)2.5 ml,溴酚蓝(Bromophenol blue)1 mg,加水定容至10 ml。
(14)10×电泳缓冲液1 L:Tris Base 30.29 g,甘氨酸(Glycine)144 g,SDS 10 g,加水溶解至1 L。
(15)1×电泳缓冲液1 L:取100 ml 10×电泳缓冲液,加水稀释至1 L。
(16)10×转移缓冲液1 L:Tris base 24.2 g,Glycine 45 g,加水溶解至1 L。
(17)1×转移缓冲液(临用前配制)1 L:100 ml 10×转移缓冲液,加700 ml水,再加200 ml甲醇(或乙醇,以生物安全角度考虑,推荐用乙醇代替甲醇)。
(18)洗膜缓冲液
1)1×PBST 1 L:1 000 ml 1×PBS加1 ml Tween-20混匀。
2)1×TBST 1 L:1 000 ml 1×TBS加1 ml Tween-20混匀。
(19)5% Milk,5 g脱脂奶粉加入洗膜缓冲液(1×PBST或1×TBST)溶解至100 ml。
(20)蛋白质浓度检测试剂盒。
(21)ECL化学发光检测试剂盒。