常见样本准备

(四)常见样本准备

1.原则

(1)每组至少6个样品重复,标识要清晰,防止样品错乱;临床样本一般建议30例以上。

(2)生物体内代谢处于动态过程中,取样时要进行液氮淬灭,以保持样品在实验结束时的代谢水平,样品要提前进行分装,以保证后期解冻次数尽量少。

(3)整个运输和保藏均需要严格低温,尽可能降低样品在运输储藏过程中发生代谢变化,保证结果的真实性。

2.具体要求

(1)组织样本:选取干净的目标部位组织,取材均一。用无尘吸水纸快速吸去残留的体液,将组织剪切成边长0.5 cm 小块或100 mg左右小块,精确称量后将组织块在盛有液氮的锡纸槽中速冻,再装入液氮预冷的螺口冻存管中,迅速进行液氮速冻5 min以上,转移至-80℃冰箱冻存。(https://www.daowen.com)

(2)血清:收集全血至真空采血管(如BD的红头真空采血管),动物血清可用10~15 ml离心管收集,静置30~45 min,4℃,≤1 300 g(根据物种稍微进行调整)离心10 min。移液器将上层血清转移到1.5 ml离心管内(防止溶血),每管不低于100μl(精确量取),-80℃保存。

(3)血浆:使用含抗凝剂的采血管(如BD EDTA 血常规管),轻柔地上下颠倒混匀,持续8~10次,以混匀血液和抗凝剂,然后4℃,≤1 300 g(根据物种稍微进行调整)离心10 min。移液器将上层血浆转移到1.5 ml离心管内(防止溶血),每管不低于100μl(精确量取),-80℃保存。

(4)尿液:晨起中段新鲜尿液(临床样本)或代谢笼24 h新鲜尿液(动物样本)直接分装到离心管中,收集后立即4℃,400~1 000 g离心10~15 min,去除细胞和杂质,收集上清液。再10 000~15 000 g,于4℃离心10 min后,吸取中层澄清的尿液,用1.5 ml离心管分装,每管1 ml(精确量取),-80℃冷冻样品。

(5)粪便样本:根据实验收集消化系统不同位置的粪便,如肠道内容物或排出粪便,精确称量后等量分装,不得固液混合,液氮速冻后保存至-80℃。

随着系统生物学的发展对各层次的组学有了更新更高的要求,现在一个发展趋势是多层组学整合分析,即是指对来自不同组学的数据源进行归一化处理、比较分析,建立不同组间数据的关系,综合多组学数据对生物过程从基因、转录、蛋白质和代谢水平进行全面的深入的阐释,从而更好地对生物系统进行全面了解。另外,随着精准医疗的发展,个体化的各组学的检测也提高到了疾病诊断和治疗指导的高度。