PEG沉淀法
PEG沉淀法是在一定盐浓度条件下，向溶液加入亲水性极强的聚乙二醇引起大分子溶质凝聚沉淀的方法。
1.实验原理 PEG有较强的脱水作用，能与疏水性蛋白质和脂类分子结合共沉淀。向具有一定浓度的盐溶液中加入PEG，PEG的极性基团分子对水有极强的亲和力，可以竞争性结合游离水分子，从而使外泌体的溶解度降低。通过低速离心快速地富集外泌体，随后进行小体积超速离心对外泌体进行纯化（图17-1）。
图17-1 PEG沉淀法原理示意图
2.主要材料和设备 PEG 6000粉末，NaCl，1×PBS，超纯水，0.45μm 滤器，无菌离心管；低温台式离心机，超速离心机，-80℃冰箱。
3.操作流程 以提取细胞培养上清液中的外泌体为例。
（1）将16 g PEG 6000、5.18 g NaCl溶于100 ml超纯水，配制成16%（w／v）的PEG 6000储备液，用0.45μm 滤器滤过后备用。
（2）收集100 ml细胞培养上清液，置于无菌离心管中。
（3）4℃，2 000 g离心10 min，10 000 g离心30 min，除去细胞碎片。(https://www.daowen.com)
（4）将上清液转移至另一无菌离心管，加入等体积的16%（w／v）的PEG 6000储备液混合，上下颠倒混匀，置于4℃冰箱过夜（12 h以上）。
（5）4℃，10 000 g离心60 min，弃去上清液。
（6）用1 ml 1×PBS重悬沉淀，4℃，120 000 g离心90 min。
（7）用100μl 1×PBS重悬沉淀，-80℃条件下可保存1年。
4.优缺点 操作简单，所需设备少，能获得大量的外泌体，可供蛋白质组学研究及RNA测序。对外泌体损害小，活性几乎不受影响。但所获外泌体纯度较低，颗粒大小不均，产生难以去除的聚合物，在发表论文时易受质疑。
5.注意事项
（1）在分离部分高黏度生物样品中外泌体前，建议使用1×PBS进行适度稀释。
（2）由于血清／血浆等样本表面常携带＞220 nm 脂类颗粒，因此，在分离此类样品中外泌体时，建议使用0.22μm 滤器对外泌体重悬液进行过滤，以消除残留在样品上的污染物。