（一）超速离心法
超速离心法是根据生物大分子和亚细胞物质在液体介质中沉降速度不同而形成不同的区带，或它们的密度不同而停留在液体介质中不同的位置将其分离。
1.实验原理 通过低速离心、高速离心交替进行使外泌体悬浮于离心管中特定位置，从而达到外泌体分离、浓缩和提纯的目的。
2.主要材料和设备 1×PBS，无菌离心管，0.22μm 过滤器；超速离心机，台式低温高速离心机，-80℃冰箱。
3.操作流程 以提取细胞培养上清液中的外泌体为例。
（1）收集50 ml细胞培养上清液，置于无菌离心管中。
（2）4℃，300 g离心10 min。
（3）4℃，2 000 g离心20 min，吸取上清液转移至另一无菌离心管。
（4）4℃，10 000 g离心30 min，将上清液转移至同样规格的无菌离心管。
（5）4℃，100 000 g离心70 min。
（6）去除上清液，用2 ml 1×PBS重悬沉淀。(https://www.daowen.com)
（7）使用0.22μm 滤器过滤悬液，4℃，100 000 g离心1 h。
（8）1 ml 1×PBS洗涤沉淀，4℃，100 000 g离心1 h。
（9）100μl 1×PBS重悬沉淀，-80℃条件下可保存1年。
4.优缺点 最常用的外泌体纯化手段，被认为是分离外泌体的“金标准”。操作简单，获得的外泌体较多，费用低。但操作较费时，回收率不稳定，纯度较低，可能存在污染的风险。重复离心操作可能对外泌体造成损害，影响其活性。
5.注意事项
（1）超速离心时，所有离心管内液体应至少为总体积的3／4。若不足，使用PBS进行调整。
（2）离心前离心管必须配平，未配平则使用PBS进行调整。
（3）使用移液管取出上清液时，应在沉淀上方留下2 mm 液体。
（4）37℃孵育沉淀物可促进其溶解，随后轻轻上下吹打混匀后吸取样品。
（5）使用0.22μm 滤器过滤悬液可消除样品上残留的污染物，这在提取血清中外泌体时尤为重要。