五、染色液的配制
1.苏木精(素) 苏木精是一种纯天然染料，是从苏木素树提炼出来的，苏木树主产墨西哥的坎偑切，苏木精的染色性能差，经过100多年精心加工配制，现用的苏木精配方，染色性能好，保持时间长，是世界上唯一的常规细胞核染料。
2.苏木精的配制 苏木精的配方很多，可根据不同需要选用，Harris配方最常用。
(1)Harris苏木精的配制:苏木精1g，硫酸铝钾15g，无水乙醇10mL，蒸馏水200mL。
先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1分钟后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用前滤纸过滤后每100mL加冰醋酸5mL。
(2)Mayer苏木精改良配法:
A液:苏木精2g，无水乙醇40mL。
B液:硫酸铝钾100g，蒸馏水600mL，稍加热使硫酸铝钾在水中溶解，将苏木精溶于无水乙醇中，再将A液与B液混合煮沸2分钟。用蒸馏水补足600mL，加入400mg碘酸钠充分混匀，苏木精染液呈紫红色。
(3)Gill改良苏木精染液的配制:苏木精2g，无水乙醇250mL，硫酸铝钾17g，蒸馏水750mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸20mL。
先将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合，加入碘酸钠待苏木精氧化成紫红色，再加入冰醋酸。
3.伊红溶液的配制
(1)水溶性伊红:伊红Y0.5～1g，蒸馏水100mL。
先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒将伊红搅起泡沫后过滤，每100mL加冰醋酸1滴。
(2)乙醇性伊红液的配制:伊红Y0.5～1g，90%乙醇100mL。
先将伊红溶于乙醇中，用玻璃棒研碎溶解后，每100mL加冰醋酸1滴。用乙醇性伊红液染细胞质后不可经水洗直接用85%乙醇脱水。
4.盐酸乙醇分化液的配制 配制方法为:浓盐酸0.5～1mL，75%乙醇99mL。此液用一段时间后需要延长或更换液体，新液分化时间要短。
5.染色中注意事项
(1)脱蜡:石蜡切片必需经过脱蜡后才能染色，脱蜡前切片要经烘烤，这样使组织与玻璃片粘贴牢固。组织切片脱蜡应彻底，脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间，所有的时间都是指新的二甲苯在室温25℃以下时，如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较厚，室温低应增加脱蜡时间，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之一。
(2)染色:石蜡切片经水洗后放入Harris苏木精染色，一般情况下在新配的苏木精溶液中只需要染1分钟左右，应根据染片的多少，逐步把染色时间延长。苏木精染色后，不宜在水中和盐酸乙醇停留过长，切片分化程度应在镜下观察，分化过度，应水洗后重新在苏木精中染色，再水洗分化和使切片在自来水或稀氨水中充分变蓝。
新配的伊红染色快，切片染色不宜过长，应根据染切片的多少逐步延长染色时间，切片经伊红染后，水洗时间要短。
(3)脱水:切片经过染色后，通过各级乙醇脱水，首先从低浓度到高浓度，低浓度乙醇对伊红有分化作用，切片经过低浓度时间要短，向高浓度时逐步延长脱水时间;脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。
(4)透明与封片:石蜡组织切片染色经过脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明，才能用树胶封片。常用切片封片胶有国产的中性树胶，光学树胶，加拿大树胶和合成树脂(DPX)。在封片时，树胶不能太稀或太稠，不能滴加得太多或太少，太稀或太少切片容易空泡，树胶也不可太多，不要使树胶溢出玻片四周太多。标签要粘贴牢固。封片中不能对着切片呼气。
(5)常规石蜡切片和H.E染色标本的质量标准(全国统一评定标准):
①切片完整，厚度4～6μm，薄厚均匀，无褶无刀痕。
②染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
作业与思考题
一、小结与讨论
1.以石蜡切片为代表，总结病理组织切片的基本制作程序及其注意事项。
2.讨论苏木精－伊红(H.E)染色技术的关键环节有哪些。
二、复习思考题
1.以石蜡切片为代表，阐述动物病理组织切片的基本制作程序。
2.简述苏木精－伊红(H.E)染色法的基本原理。
3.简述苏木精－伊红(H.E)染色法的人工染色步骤。
(杨仕群)