高产花青素玫瑰茄细胞系的筛选

1.细胞悬浮液中单细胞的获得率

采用的小细胞分离法为物理法。悬浮培养的细胞经250目铜网过滤后，得到的单细胞悬液中单细胞得率为85.37%，2～3个细胞小团占8.95%，4～8个细胞小团占5.68%。采用物理方法很难获得100%的单细胞。

2.细胞生长与植板率的关系

植板细胞的生长年龄与克隆的形成密切相关，处于旺盛分裂期，即对数生长期的细胞比生长早期与静止期的细胞更容易诱导分裂，植板率高。试验结果表明，悬浮培养8天的玫瑰茄细胞置板率最高，为10.99%。

3.pH与植板率的关系(https://www.daowen.com)

最适生长通常出现在pH5～6范围内的培养基中，培养基pH影响细胞膜的通透性，进一步影响到营养物质的运输及细胞对内源代谢物流失的控制，从而影响到细胞克隆的形成与生长。玫瑰茄细胞克隆最适pH为5.84，此时植板率为8.10%。

4.CaCl2对植板率的影响

钙的主要功能是渗入到细胞壁的中层结构中，与中层的酸性果胶质成分结合成不溶性盐类，使原先半流动的结构硬起来。在调节细胞膜通透性方面，钙也起着重要作用，钙对沉淀质膜上或质膜内的磷脂与蛋白质是必不可少的。当基质中缺钙时，细胞膜就会出现“渗漏”。而钙对细胞生长和分裂的调节作用可能与不同浓度的钙对微管聚合的调节有关。另外，钙能够维持许多酶（NAD激酶、蛋白质激酶、α-淀粉酶）活性或稳定性（α-淀粉酶）。当培养基中CaCl2·2H2O浓度达750mg/L时，玫瑰茄细胞植板率最高，为11.65%。此外，钙能有效地促进植物培养细胞生产花青素。

5.细胞密度对植板率的影响

要使植物细胞单细胞克隆获得高的植板率，平板中的细胞浓度应在103～105细胞/mL之间。玫瑰茄植板率随着细胞密度的增加而提高，但细胞系的拣出也更困难，细胞密度低于6×103细胞/mL时，植板率急剧下降。