1.1.2 基因工程的基本过程
依据定义,基因工程的整个过程由工程菌(细胞)的设计构建和基因产物的生产两大部分组成。前者主要在实验室里进行,其单元操作过程如下:
(1)从供体细胞中分离出基因组DNA,用限制性核酸内切酶分别将外源DNA(包括外源基因或目的基因)和载体分子切开(简称“切”);
(2)用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段接到载体分子上,形成重组DNA分子(简称“接”);
(3)借助于细胞转化手段将重组DNA分子导入受体细胞中(简称“转”);
(4)短时间培养转化细胞,以扩增重组DNA分子或使其整合到受体细胞的基因组中(简称“增”);
(5)筛选和鉴定转化细胞,获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞(简称“检”)。
由此可见,基因工程的上游操作过程可简化为:切、接、转、增、检(图1-2)。