5.2　PCR扩增目的基因

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种在体外模拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术，它使目的DNA片段在很短的时间内获得几十万乃至百万倍的拷贝。利用PCR技术可以直接从基因组DNA或cDNA中快速、简便地获得目的基因片段，快速进行外源基因的克隆操作。PCR扩增目的基因的前提是必须知道目的基因两侧或附近的DNA序列。

1.从基因组中直接扩增目的基因

如果知道目的基因的全序列或其两端的序列，通过合成一对与模板互补的引物，就可以十分有效地扩增出所需的目的基因（图5-5）。如果要大量扩增未知序列的特异DNA片段，或是更长的DNA片段，则需选择特殊类型的PCR策略，如套式PCR、反向PCR、不对称PCR、简并PCR、锚定PCR等。

图5-5　从基因组中直接扩增目的基因

2.从mRNA中扩增——逆转录PCR

逆转录PCR是通过mRNA逆转录生成cDNA，再进行PCR扩增反应的基因克隆（分离）技术（图5-6）。RACE（rapid amplification of cDNA ends，RACE）-PCR是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。cDNA末端快速扩增是一种从低丰度转录本中快速扩增cDNA 5'和3'末端简单而有效的方法，cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达和基因功能的研究至关重要。

图5-6　从mRNA中扩增目的基因