3.2.7　质粒DNA的分离与纯化

实验室常用的提取载体质粒或重组体的方法是SDS碱裂解法。实验操作步骤如下：

（1）用含有EDTA的缓冲液悬浮菌体细胞，并加入溶菌酶裂解细胞壁；

（2）加入SDS-NaOH混合液，分离细胞膜和细胞内含物；

（3）加入高浓度乙酸钾缓冲液沉淀染色体，去除染色体DNA和大部分蛋白质；

（4）离心后保留上清液，用含有苯酚和氯仿的溶液萃取，去除微量蛋白质和核酸酶；

（5）利用乙醇沉淀位于水相中的质粒DNA；

（6）利用RNase降解微量的RNA分子。

利用此方法可以获得纯度较高的质粒DNA，且反应规模可以根据不同的要求进行扩大或缩小，缺点是操作烦琐、费时。基于这种技术原理开发了多种商业化的试剂盒，试剂盒中配置了高效的DNA吸附柱，所以将质粒吸附在吸附柱，再进行DNA洗涤，可以有效去除残余的蛋白质和RNA，用水洗脱质粒DNA，获得高纯度的质粒。改进后的商业化试剂盒简化了操作流程，缩短了质粒DNA提取时间。