2.5.2　Bal 31核酸酶

Bal 31核酸酶是从埃氏交替单胞菌（Alteromonas espejiana）BAL31中分离的。Bal 31核酸酶具有单链特异的内切酶活性，当底物为单链DNA分子时，可从3'-OH末端迅速降解DNA。当底物是双链环形的DNA分子时，Bal 31核酸酶利用其单链特异性核酸内切酶活性，通过对单链缺口或瞬时单链区的降解作用，将超螺旋的DNA切割成开环结构，进而成为线状双链DNA分子。Bal 31核酸酶又具有双链特异的核酸外切酶活性，对于线状双链DNA分子，它表现为3'→5'外切酶活性和5'→3'外切酶活性，可有控制地从3'末端和5'末端逐个水解除去单核苷酸，产生缩短了的DNA分子（图2-21）。除此以外，Bal 31核酸酶还可起到核糖核酸酶的作用，催化核糖体和tRNA的降解。Bal 31核酸酶的活性需要Ca2+和Mg2+，在反应混合物中加入EGTA（ethyleneglycol-bis（β-aminoethyl ether）tetraacetic acid，乙二醇双β-氨基乙醚四乙酸）可终止反应。

图2-21　Bal 31核酸酶的活性

（引自Brown，1990）

Bal 31核酸酶由于具有上述特殊的性能，在分子克隆实验中是一个十分有价值的工具酶。其主要用途包括：①确定DNA片段的限制酶图谱；②诱发DNA发生缺失突变；③研究超螺旋DNA分子的二级结构，并改变因诱变剂处理所出现的双链DNA的螺旋结构。