4.5.1　Sanger双脱氧链终止法

Sanger等提出“DNA双脱氧链末端终止测序”，又称Sanger测序，是利用DNA聚合酶Ⅰ的聚合反应，在反应体系中引入一定比例的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）作为终止剂，由于DNA聚合酶不能区分dNTP和ddNTP，因此ddNTP可以掺入新生单链中，而ddNTP的核糖基3'-碳原子上连接的是氢原子而不是羟基，因而不能与下一个核苷酸聚合延伸，合成的新链在此终止，终止位点由反应中相应的双脱氧核苷酸三磷酸而定。它们具有共同的起始位点，但终止在不同的核苷酸上，可通过高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测，其原理如图4-15所示。