第7章　外源基因的原核表达系统

【本章简介】　在各种外源基因的表达系统中，原核表达系统是最早被采用的，也是目前相对较为成熟的表达系统。由于原核表达系统具有能够在较短时间内获得大量基因表达产物、所需成本相对比较低等优点，原核表达系统成为合成外源蛋白的首选系统。通常，外源基因的表达系统主要由相对配套的表达载体和表达菌株组成。该项技术的主要原理是将外源目的基因DNA片段克隆入相应的表达载体中，再转化到相应的表达菌株中，通过表达菌株体内的转录和翻译系统的合成，最终获得所需目的蛋白。这种方法在蛋白质表达纯化、定位及功能分析等方面都有广泛的应用。虽然原核表达系统简便、快捷，但它还存在许多难以克服的缺点，例如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控，有些基因的持续表达可能对宿主细胞产生毒害作用，过量表达可能导致非生理反应，有些目的蛋白质会以包含体的形式表达，导致产物生物活性的丧失和构象的改变，此外，原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善，缺少蛋白质的糖基化、磷酸化等翻译后加工，表达产物的生物活性较低。因此需要对原核表达系统进行不断改进和完善。