4.1.2　DNA的提取方法

从各种材料中提取DNA的方法不同，分离提取的难易程度也不同。根据细胞破碎后，分离DNA与蛋白质所采用的技术及试剂的差异，常用的有以下几种提取方法。

1.CTAB法

CTAB是十六烷基三甲基溴化铵的简写，是一种阳离子去污剂，能溶解细胞膜与核膜，解聚核蛋白，且能与DNA形成CTAB-DNA复合物，该复合物在高盐浓度下是可溶解的。用氯仿等有机溶剂抽提可使蛋白质变性、多糖沉淀，通过离心除去沉淀，而CTAB-DNA复合物保留在上清液中。降低盐浓度，则CTAB-DNA复合物发生沉淀，通过离心获得沉淀并用高盐缓冲液溶解后，加入异丙醇使CTAB留在溶液中而DNA沉淀出来。该方法常用于含有多糖、酚类化合物的植物基因组DNA的提取。在该法中可将聚乙烯吡咯烷酮（PVP）与多酚结合形成复合物，从而有效避免多酚类化合物介导的DNA降解。

2.SDS法

SDS是十二烷基硫酸钠的简写，SDS法的基本原理是将已研磨的组织细胞加入含高浓度SDS的抽提缓冲液，在较高温度（55～65℃）下细胞裂解，染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采取提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖类杂质（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚-氯仿抽提，反复抽提后用乙醇或异丙醇沉淀水相中的DNA。该提取法主要应用于植物DNA的提取和质粒提取。

3.浓盐提取法

核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液（在1.0 mol/L的NaCl溶液中溶解度比在纯水中高2倍），但在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将DNA和蛋白质分离，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清液，加入冷乙醇或异戊醇即可使DNA沉淀析出。

4.苯酚抽提法

苯酚作为蛋白变性剂，同时有抑制DNase降解DNA的作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白质与DNA连接键已断，变性后的蛋白质分子表面又含有很多非极性基团，蛋白质与苯酚相似相溶而溶于酚相，而DNA则溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。