9.4.3　外源基因在转化植株中转录的检测与鉴定

1.Northern印迹杂交

Northern印迹杂交是在转录水平上以DNA或RNA为探针，检测RNA链。Northern印迹杂交比Southern印迹杂交更接近于目的性状的表现，更有现实意义。但Northern印迹杂交的灵敏度有限，RNA提取条件要求严格，且RNA在材料的含量不如DNA高，对细胞中低丰度的mRNA检出率较低。因此，实际工作中更多的是利用RT-PCR技术对外源基因的转录水平进行检测。

2.RT-PCR

RT-PCR（reverse transcription PCR）也是对外源基因在植物内的转录水平表达的检测。其原理是提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录表达。因此，RT-PCR可以在mRNA水平上检测目的基因是否表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏度提高了几个数量级，使一些极为微量的RNA样品的分析成为可能。该方法简单快速、灵敏度高，能够检测出低丰度的mRNA，特别是在外源基因以单拷贝方式整合时，其mRNA的检测常用RT-PCR。