脾气虚证动物模型的制备方法
脾气虚证模型多采用病因造模的思路，即将符合单一或多种病因理论的致病因素作用于实验动物，制备单纯脾气虚证模型，依据应用的病因理论数量分为单病因造模法与多病因造模法，常用的方法有饮食失节法、劳倦过度法、饮食偏嗜法、苦寒泻下法、番泻叶法、X线法、秋水仙碱法、利血平法等，以上方法或单独使用或组合。
（一）单因素造模法
1.饮食失节法
《脾胃论·脾胃虚实传变论》曰：“夫饮食失节，寒温不适，脾胃乃伤。元气之充足，皆由脾胃之气无所伤，而后能滋养元气；若胃气之本弱，饮食自倍，则脾胃之气既伤，而元气亦不能充，此诸病之所由生也。”祖国医学认为，脾主运化，为后天之本。若饮食失节，过食生冷，或过服寒凉药物，或饥饱无度，伤及脾胃，致使脾胃虚弱。依据“饮食自倍，肠胃乃伤”理论，制备脾气虚模型的方法称为饮食失节法。造模中，常用于伤害脾脏功能的饮食失节包括饥饱无度、过食肥甘、生化无源等。
（1）饥饱无度：即根据中医饥饱无度损伤脾胃理论制备脾虚模型的方式，给小鼠喂饲甘蓝，数量不限制，每2天加喂数量不限的猪脂1次，造模时间9天。
（2）过食肥甘：即依据“饮食自倍，脾胃乃伤”理论制备脾虚模型的方式，采用过食肥甘厚腻方法给小鼠每天喂以自制的高蛋白、高热量饲料，饲料由鱼松、豆粉、面粉、牛奶粉按1∶2∶1∶1的比例配成。将上述食材做成饼干，用电热恒温鼓风干燥箱烘干，代替食物喂食小鼠，同时喂以50%牛乳0.2mL/10g，自由摄食和饮水，连续7天，造成脾气虚证模型。
（3）生化无源：即限制小鼠饮食中蛋白质和热量摄入，模拟人体“生化乏源”的气血亏虚状态。其方法是小鼠喂含7%蛋白质的饮食2.5g/（只·天）（合蛋白质约0.17g，热量36.3kJ），平均进食量约5.76g/（只·天）（合蛋白质1.16g，热量81.3kJ）；同时，每天加喂鲜青菜约3g/只，饮水量不限。造模时间15天，小鼠可表现出脾气虚症状。
2.苦寒泻下法
苦寒药物易损伤脾胃，形成脾虚之证，如《脾胃论》“大忌苦寒之药损其脾胃”，《本草纲目》对大黄的论述“其性苦寒，能伤元气耗阴血”。1979年，北京师范大学利用上述理论，创立苦寒泻下法制备脾气虚证动物模型。常用的苦寒泻下药包括大黄、番泻叶等。
（1）大黄制剂制备方法：取生大黄500g（按实际用量调整），加10倍量纯净水浸泡1小时，大火煮开、小火煎沸10分钟，煎液经过二层纱布过滤，再次加入6倍量纯净水，二煎煎沸10分钟，过滤方法同上。合并二次煎液，将滤液在60℃水浴中浓缩成100%（每升溶液中含大黄生药1kg，1g/mL）或200%（每升溶液中含大黄生药2kg，2g/mL）的水煎液，4℃保存。
造模时，小鼠：常用浓度为1g/mL的大黄水煎液，每日0.5～0.8mL为小鼠灌胃，每日1次，连续5～7天，制备脾气虚小鼠动物模型；大鼠：常用浓度为2g/mL的大黄水煎液，每日4～6mL为大鼠灌胃，每日1次，持续10～12天，制备脾气虚大鼠动物模型。
（2）番泻叶制剂制备方法：取番泻叶500g（按实际用量调整），加10倍量纯净水浸泡1小时，大火煮开、小火煎沸10分钟，煎液经过二层纱布过滤，再次加入6倍量纯净水，二煎煎沸10分钟，过滤方法同上。合并二次煎液，将滤液在75℃水浴中蒸发浓缩成100%（每升含1kg生药，1g/mL）的水煎液，4℃保存。
造模时，小鼠：1g/mL番泻叶水煎液给小鼠灌胃，每次0.3～0.5mL，每天1次，持续5～8天，制备脾气虚小鼠动物模型；大鼠：1g/mL番泻叶水煎液给大鼠灌胃，每次4mL，每天2次，持续20天，制备脾气虚大鼠动物模型。
3.耗气破气法
《本草经疏》曰：“脾虚忌下、降泄、破气。”有文献依据“亢则害，承乃制”的原则，应用小承气汤加减变化来造模脾气虚模型，称为耗气破气法。该方法常用于大鼠脾气虚证模型的制备。
生大黄、厚朴、枳实按照1∶1∶1比例，其中，厚朴、枳实先以10倍的纯净水量浸泡40分钟，在加入生大黄浸泡20分钟。然后厚朴、枳实先煎沸10分钟，再下大黄共煎10分钟，煎液经二层纱布过滤；加入6倍量纯净水，二煎煎沸10分钟，过滤方法同上。合并二次煎液，于60℃水浴中浓缩成200%（2g/mL）的水煎液，4℃保存。大鼠以上述浓度的水煎液灌胃，每次2mL，每日2次，持续6周，制备大鼠脾气虚模型。也有将枳实、厚朴、大黄的比例设为3∶3∶2或1∶1∶2者，方药制备及灌胃条件相同，同样可制备大鼠脾气虚模型。
4.劳倦过度法
《黄帝内经》云：“人饮食劳倦即伤脾。”劳倦过度易伤脾，使脾虚气耗。因此，通过使机体过度运动而造成脾气虚的方法称为劳倦过度法。常用的伤害脾气，使脾气因过劳而虚弱的方法有游泳力竭法和跑步过劳法。
小鼠：每天将小鼠置于（28±2）℃温水中游泳至力竭（判定标准为小鼠鼻部没入水下5秒），同时可在此基础上每天剥夺1/3睡眠时间（大约5小时），连续造模12天。
大鼠：每日上午将大鼠置于（28±2）℃的温水中游泳至力竭（判定标准为大鼠鼻部没入水下5秒），总共造模14天；或隔天将大鼠置于跑步机上连续跑步30分钟，造模时间21天。
猪：运动器材为小型跑步机。每日对巴马小型猪进行冲刺跑步训练，起始速度从0.8km/h起。首先对巴马小型猪进行适应性跑步训练1周。1周后巴马小型猪表现为适应跑步，方可进入实验阶段，跑步过程中，在一定速度进入稳定跑态后，若稳定跑态的持续时间大于30秒，可增加0.3km/h（可根据实际情况以0.3的倍数进行增加），直至冲刺到最大耐受速度为止，若不能进入稳态跑步或能进入稳态跑步但不能维持30秒，则根据实际情况适当减速；最终至巴马小型猪不能继续跑动，趴地喘息为止。造模时间持续到小猪出现脾气虚症状。
5.偏食五味法
《素问·宣明五气篇》曰：“五味所入：酸入肝，苦入心，甘入脾，辛入肺，咸入肾。”又有云：“味过于苦，脾气不濡，胃气乃厚。”根据中医五行理论，五脏对五味各有特定的亲和性，若单用某一性味或某一性味服用过多，就会对五脏产生一定的影响。所以，通过偏食某一性味来制备脾气虚模型的方法称为饮食偏食法（或偏食五味法），即对模型动物采用过酸、过苦、过辛等药物或试剂灌胃，造模时间3天到2周不等，常用的方法有偏食酸味和偏食苦味。
（1）偏食酸味
祖国医学认为，酸味药与肝脏关系密切，《黄帝内经》记载“酸生肝”“夫五味入胃，各归所喜。故酸先入肝”“肝欲酸”，表明酸味喜入肝，而肝对酸味有偏嗜。《素问·生气通天论》又云“味过于酸，肝气以津，脾气乃绝”，认为酸味药入肝，但长期过量的服食，可导致肝气过于亢盛，同时肝气欲散不欲收，而酸性本收而涩，更不利于肝气之疏泄，久则必横逆乘脾，损伤脾气，以致使脾气衰竭。即所谓“味过于酸，肝气以津，脾气乃绝”。
山茱萸造模法：适量山茱萸置煎药机内，加水适量，浸泡1小时，水煎煮，第1次6倍水，1小时；第2次3倍水，1小时。取两次水煎液混合，浓缩至浓度为1.6g/mL（生药）的药液。采用低剂量组（4.1g/kg）、中剂量组（8.2g/kg）、高剂量（12.3g/kg）灌胃给药，灌胃体积为1mL/100g，每天1次，连续给药9周。以上3个剂量组均可导致脾气虚的发生。
食醋造模法：①大鼠使用山西白醋每日每只灌胃10mL/kg；连续造模10天。②使用食醋与白酒并用的方法，食醋pH为3～5，白酒为50°的食用白酒（或使用50%的医用乙醇）；第1日用50°白酒2mL灌胃，白酒损伤脾胃，破坏动物胃的屏障作用，使大鼠脾胃受病；第2日以后每天用食醋2毫升灌胃加重病情，造模时间为10天，可造成脾虚模型。
（2）偏食苦味
与苦寒泻下法类似，但常选用黄连、黄芩等苦味药。
①将黄连以10倍量冷水浸泡30分钟，大火沸腾煎煮20～30分钟，然后文火煎煮15～20分钟，煎液经二层纱布过滤，加入8倍量冷水，使用相同的方式进行二次煎煮，二次煎煮时间应少于一次煎煮时间，将两次煎液合并，并按100%的浓度浓缩。造模时，每日每只小鼠灌胃0.25mL/10g的100%黄连浓缩液，连续造模15天，可得到脾气虚小鼠模型。②黄芩、黄连比例为3∶1，加入清洁自来水浸泡30分钟，常规煎煮2次，30min/次，4层纱布过滤滤液，2次药液混合后，水浴加热浓缩为每1mL药液含2g生药的提取药液。4.4g/kg为大鼠灌胃，连续15天，可出现脾虚症状。
除以上两种饮食偏食法外，何晓辉首先研制了偏食辛温燥热脾虚小鼠模型：每日用炒过的馄合饲料喂养（豆饼2%、大米粉20%、米糖16%、玉米粉15%、大豆粉20%、鱼粉5%、骨粉3%、食盐1%），同时以新鲜辣椒作为饲料喂养，连续14天即可得到相应模型。
6.X线法
腹部X线照射可致大、小肠黏膜溃疡、狭窄而发生吸收不良综合征，该征与中医脾气虚证密切相关，同时X线照射引起的肌肉萎缩、血小板减少而致的各种出血与中医脾气虚脾不统血证密切相关。因此使用X线制备脾气虚动物模型是可行的。
实验器具：日本产HG7001型X线远距离照射机。使用0.3～0.5mm厚的有机玻璃制备规格为20cm×7.5cm×5cm的照射盒，为便于通气，应将照射盒打上小孔。
造模方法：将大鼠固定在制备的照射盒中，将照射中心置于大鼠胸骨下缘沿腹正中线5cm处，射野为3×3cm，照射距离为50cm，电压10MV，射时1分钟，每次按250拉德/分进行腹外照射，共进行2次，每次间隔7天。照射10天，即可得到脾气虚大鼠模型。
7.秋水仙碱法
根据临床观察，治疗肿瘤的化疗药物如秋水仙碱，可导致患者出现程度不等的脾气虚弱征象，如肌无力，肌病，营养吸收不良及出血等，且此类症状可通过相关治脾药物得到缓解，说明实验时可使用秋水仙碱法来制备脾气虚动物模型。
造模时，将模型大鼠单独饲养，按照每日每只1.2mg/kg胃饲秋水仙碱溶液，总共造模25天，可得到大鼠脾气虚模型；将小鼠每天灌胃秋水仙碱溶液3mg/kg，连续造模14天，可得到脾气虚小鼠模型。
8.利血平法
利血平法作为一种现代方法，经相关研究，也可用来制备脾气虚动物模型。该法主要依据利血平影响到节后交感神经末梢内的递质-去甲肾上腺素（NE）的贮存和释放，并降低脑内和外周神经中单胺类递质（NE，DA，5-HT）含量，从而降低交感肾上腺素能神经的功能，使副交感神经功能亢进，同时，能引起腹泻，耗气。但有认为利血平上午用药毒性较大。
小鼠：使用利血平注射液皮下注射，用药量0.15～1mg/（kg·d），平均约0.37mg/（kg·d），用药7～14天，平均约10天，总用药量1.1～9mg/kgbw，平均约3.7mg/kgbw；体重约25g时，利血平注射液腹腔注射，用药量0.25mg/kgbw/天，用药7～9天；体重25～30g时，利血平注射液，口服，用药量1mg/kgbw/d，造模7天；造模时应根据小鼠性别，年龄，体重等做相应调整。大鼠：肌肉注射利血平注射液，用药量0.2mg/（kgbw·d），用药3～5天；腹腔注射时，用药量0.4mg/（kgbw·d），用药1天，然后0.2mg/（kgbw·d），用药4d；皮下注射时，用药量0.05mg/（kgbw·d），用药6d；同样也需根据实验动物因素，环境因素做相应调整。
兔：利血平注射液肌肉注射时，用药量0.3mg/（kgbw·d），用药3天。使用以上方法，均可得到相应脾气虚动物模型。
（二）多因素造模法
单因素造模法由于涉及的因素单一而常出现模型症状不明显、效果不稳定、维持时间短等情况，具有一定的局限性，随着研究者对脾气虚证病因病机的深入了解，后期出现多病因造模法，此方法相较于单因素造模法实验结果更具有说服力，更贴合临床，可重复性好，效果稳定，成为近年来复制脾气虚证的主流方法。
1.苦寒泻下结合劳倦过度法
大鼠：制备大黄水煎液（浓度如单病因造模法中的苦寒泻下法），每日上午以1.5mL/100g灌服大黄水煎液，每日1次；每日下午将动物负重——于大鼠尾根部缠绕重量为该大鼠体重10%的保险丝，放入水深50cm、水温20℃的水槽中游泳，以力竭——大鼠鼻尖没入水面10秒为度，每日1次；造模时间21天。可替换为番泻叶水煎液。
小鼠：小鼠施于游泳，2～5分钟，水深30cm，水温25±2℃，以身体下沉为度，每日1次；同时予以番泻叶水煎剂（浓度同上）0.5mL/（只·d），每日1次；造模时间8天。
2.苦寒泻下结合饮食失节法
根据不同的实验动物（大鼠、小鼠），固定时间如上午7：00—8：00应用单因素造模法中的苦寒泻下法，大黄或番泻叶水煎剂按实验动物的不同灌胃给药，剂量同前。同时予以控制饮食，控制饮食的方式可选择时隔日喂食，即自由饮食24小时后断食24小时；或可选择禁食12小时，如每日早8：00给食，晚20：00开始断食。造模时间根据实验动物的不同，可为2～4周，观察动物是否出现脾虚状态。
3.劳倦过度结合饮食不节法
根据不同的实验动物（大鼠、小鼠）选择单因素劳倦过度法，一般为游泳、跑步致力竭，游泳以鼠鼻部没入水下5秒为度，跑步法为将大鼠或小鼠每日放在跑步机上跑步，时长为15～30分钟，使实验动物过度疲劳，时间可根据小鼠状态调整。在劳倦过度的前提下控制饮食，常用的饮食不节法有3种：①大鼠单日用猪油灌胃每天2次，每次3mL；双日喂不限量大白菜，使动物饮食失节，造模总时长为3周。②大小鼠单日禁食，自由进水；双日自由饮食，自由饮水，造模时长为2周。③大小鼠第1天先过量喂食，接着连续2天禁食处理，不限制饮水，重复操作5次。
除以上方法外，还有振荡器联合饮食不节的造模方式，其方法是讲实验组的鼠笼固定在振荡器上，启动振荡器，震动20分钟、停10分钟，交替震荡，每日震荡10小时，共震荡33天，震荡的同时，普通饲料隔日给食，给食日自由饮食，不限制。该方法也可制备脾虚模型，且可成组操作，但每日震荡所需时间较长，各团队可根据实际情况选择。
4.耗气破气结合饮食不节法
根据不同的实验动物（大鼠、小鼠）选择单因素耗气破气法，常用药物及计量同前。同时使用饮食不节法，最常用的为隔日禁食，造模时间根据实验动物的不同为7～42天不等，根据实验动物是否出现脾气虚表现定夺。
多病因造模法除了以上两两因素组合造模为脾气虚模型外，还可应用两种以上方法造脾气虚模型，如苦寒泻下、饥饱失常结合劳倦过度法，耗气破气、劳倦过度结合饥饱失常法，五味偏食、控制饮食结合劳倦过度法，饮食失节、疲劳过度结合情志失调法等，其中情志失调法常采用夹尾方法激惹实验动物进行脾气虚证造模。以上方法均可参考使用。
（三）其他造模方法
除上述传统的病因学造模方法之外，随着现代医学的发展，近年来学者开始借鉴现代医学的方法研究中医，出现了制造脾虚模型的新方法，新思路，如手术法、转基因小鼠模型造模法等。
1.手术法
临床上，行右半结肠切除术的患者在手术后相当长的一段时期里表现出气短、食少、腹胀、神疲乏力等脾气虚证症状，给了模型研究者启示，通过手术的方式制备脾气虚模型。章学林试验此法，将大鼠麻醉后，通过寻找盲肠、辨认血管、确定范围、切除-吻合等几个关键步骤，切除回肠肠管长约400mm、结肠肠管长约50mm，术后大鼠表现出脾虚证候，成功建立脾气虚证模型。
2.转基因小鼠模型造模法
也有人认为基因敲除小鼠是当今最常用的疾病模型工具，其中一些表型与中医脾气虚证的某一方面特征具有高度相似性，该类小鼠兼具稳定性好、重复性好以及具有确切的疾病特征等优点，是复制脾虚模型的重要选择之一。基因突变小鼠（如APCmin/+）、基因敲除小鼠（如Txnip-/-、IP3R2-/-、db/db小鼠）以及条件性敲除Pten小鼠具有易感肿瘤、肌肉失养、肥胖、能量代谢障碍等特征，与脾虚运化失司、清阳不升、聚湿生痰和抗病能力降低相关，该类模型具有较好的转化潜力，将有助于深化脾气虚证候的本质研究。