从脾论治心力衰竭与心肌细胞凋亡

唐薪骐等研究发现，苓桂术甘汤可以改善慢性心衰大鼠的心功能、抑制慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡，减轻心肌损伤及心肌纤维化。实验选取SPF级大鼠45只，随机分为空白组（n=10）和造模组（n=35），采用腹腔注射阿霉素（Adr）建立慢性心衰大鼠模型，4mg/（kg·w），共计6周。将造模成功30只心力衰竭大鼠随机分为模型组（n=10）、卡托普利组（n=10）、苓桂术甘汤组（中药组，n=10），加上未造模的空白组，本实验分组共计分为4组。中药组灌胃剂量为2.79g/（kg·d），卡托普利组灌胃剂量为2.25mg/（kg·d），模型组和空白组给予等体积生理盐水，共计4周。实验结束后心脏彩超检测大鼠心脏LVEF、LVIDd值、HE和Masson染色观察心肌细胞病理组织学改变、Tunel法检测大鼠心肌细胞凋亡、Western Blot法检测内质网应激相关蛋白表达。该研究发现：①心脏结构和功能变化：药物治疗前，造模组大鼠LVEF≤55%，证明心衰模型构建成功。药物治疗后：模型组LVEF与空白组比较明显降低，LVIDd较空白组明显升高，药物干预后中药组和卡托普利组较模型组LVEF明显升高，LVIDd明显降低，中药组改善LVEF效果优于卡托普利，但LVIDd两组无组间差异，无统计学意义。②心肌组织形态结构的比较：模型组较空白组心肌细胞排列杂乱无章，形态不规则，存在明显的蓝染胶原纤维沉积；经药物治疗后，卡托普利组及中药组较模型组心肌细胞排列相对整齐，形态较规则，蓝染的胶原纤维较少；中药组抑制心肌纤维化效果优于卡托普利组。③心肌细胞凋亡情况：模型组心肌细胞凋亡率明显高于空白组，中药组及卡托普利组心肌细胞凋亡率较模型组模型降低；中药组抑制心肌细胞凋亡优于卡托普利组。④对心肌组织中内质网应激标志性蛋白的影响：Western Blot显示模型组GRP78、caspase-12、calpain蛋白表达较空白组显著增加；中药组及卡托普利组GRP78、caspase-12、calpain蛋白表达较模型组降低；中药组与西药组上述蛋白均无组间差异。⑤PERK-e IF2α-ATF4/CHOP内质网应激信号通路的影响：模型组PERK磷酸化、e IF2α磷酸化、ATF4、CHOP蛋白的表达明显高于空白；药物治疗后中药组和卡托普利组较模型组PERK磷酸化、e IF2α磷酸化、ATF4、CHOP蛋白显著降低；中药组e IF2α磷酸化、CHOP蛋白较托普利组均无组间差异，中药组抑制PERK磷酸化、ATF4优于卡托普利组。该实验研究得出以下结论：①苓桂术甘汤可以改善慢性心衰大鼠的心功能、抑制慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡，减轻心肌损伤及心肌纤维化。②苓桂术甘汤抑制慢性心衰大鼠内质网应激损伤，其调控机制可能与下调PERKe IF2α-ATF4/CHOP信号通路有关。③苓桂术甘汤及卡托普利抑制慢性心衰大鼠内质网应激作用相当，均可能与抑制PERK-e IF2α-ATF4/CHOP信号通路有关。

实脾饮出自宋·严用和《济生方》，是温脾阳利水的代表方剂。雷雨探讨了实脾饮对异丙肾上腺素（ISO）诱导的慢性心力衰竭（CHF）大鼠心功能、NT-proBNP、Caspase-3及心肌细胞凋亡的影响。实验将体重180～200g的健康雄性SD大鼠（n=80），适应性饲养7天后随机分为正常对照组（n=10）和造模组（n=70），造模组予腹腔注射ISO[5mg/（kg·d）]连续14天后，根据彩色多普勒超声测得左室射血分数（LVEF）数值结果，判断CHF大鼠造模是否成功。将造模成功的CHF大鼠（n=40）随机分为模型对照组[n=10，生理盐水7.5mL/（kg·d）]、实脾饮低剂量组[n=10，实脾饮混悬液灌胃3.75g（生药）/（kg·d）]、实脾饮中剂量组[n=10，实脾饮混悬液灌胃7.5g（生药）/（kg·d）]、实脾饮高剂量组[n=10，实脾饮混悬液灌胃15g（生药）/（kg·d）]，连续干预治疗14天后，再次采用彩色多普勒超声检测各组大鼠LVIDs、LVIDd、LVEF及FS；采用ELISA法检测各组大鼠血清NT-proBNP水平；采用免疫组化法检测各组大鼠Caspase-3蛋白表达并分析表达程度；采用TUNEL染色检测各组大鼠心肌组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数。研究发现：①各组大鼠一般情况观察：正常对照组大鼠实验过程中正常进食饮水，皮毛光泽，精神状况及活动量良好。造模过程中死亡21只大鼠，死亡率为30%。造模组大鼠逐渐出现扎堆蜷缩，进食饮水、活动量较造模前及正常对照组减少，皮毛光泽度较前有所下降，阴囊出现水肿。实脾饮干预治疗期间，实脾饮各剂量组大鼠精神逐渐好转，进食饮水、活动量较前及模型对照组有所增加，阴囊水肿症状较前有一定改善。②各组大鼠超声心动图各检测指标：与正常对照组相比，模型对照组和实脾饮低、中、高剂量组LVIDs明显升高，LVEF、FS明显降低；模型对照组和实脾饮低、中、高剂量组LVIDd均升高，但差异无统计学意义。与模型对照组比较，实脾饮低、中、高剂量组大鼠LVEF、FS明显升高；实脾饮低、中、高剂量组LVIDs、LVIDd较模型对照组降低，但差异无统计学意义。实脾饮组间比较，实脾饮中剂量组LVEF、FS升高最明显；实脾饮低、高剂量组LVEF、FS水平差异无统计学意义。③各组大鼠血清NT-pro BNP水平：与正常对照组相比，模型对照组和实脾饮低、中、高剂量组血清NT-pro BNP水平明显升高。与模型对照组比较，实脾饮低、中、高剂量组大鼠血清NT-pro BNP水平均显著降低。实脾饮组间比较，实脾饮中剂量组的血清NT-pro BNP水平降低最明显；实脾饮低、高剂量组血清NT-pro BNP水平差异无统计学意义。④各组大鼠心肌细胞Caspase-3蛋白表达：正常对照组大鼠心肌细胞的细胞质中可见少量的棕色颗粒物，而模型对照组可见大片棕色颗粒物，实脾饮低、中、高剂量组皆可见不同程度的棕色颗粒物。经分析Caspase-3免疫阳性产物表达程度显示，与正常对照组比较，模型对照组、实脾饮低、中、高剂量组的Caspase-3平均光密度均升高。与模型对照组比较，实脾饮低、中、高剂量组的Caspase-3平均光密度均降低。实脾饮组间比较，实脾饮中剂量组的Caspase-3平均光密度降低最明显；实脾饮低、高剂量组差异无统计学意义。⑤各组大鼠心肌细胞凋亡率：正常对照组大鼠心肌细胞的细胞核多呈蓝色，可见少量细胞核呈棕色，模型对照组棕色细胞核明显增多，实脾饮低、中、高剂量组皆可见不同程度棕色细胞核。经计算心肌细胞凋亡率显示，与正常对照组比较，模型对照组、实脾饮低、中、高剂量组的心肌细胞凋亡率均明显升高。与模型对照组比较，实脾饮低、中、高剂量组的心肌细胞凋亡率均降低。实脾饮组间比较，实脾饮中剂量组的心肌细胞凋亡率降低最明显；实脾饮低剂量与高剂量组差异无统计学意义。该实验认为实脾饮能一定程度地改善CHF大鼠心功能，降低血清NT-proBNP水平，抑制心肌细胞凋亡，从而延缓心力衰竭的发展，其作用机制可能与下调Caspase-3蛋白表达有关。