脾虚痰浊证动物模型的制备方法
根据中医病因病机理论,常见的脾虚痰浊动物模型制备方法有:饮食过逸或者复合因素——饥饱失常、劳倦过度结合过食肥甘;劳逸失常结合过食肥甘;饮食失节、劳倦过度结合苦寒伤脾等。其中,杨关林教授项目组长期从事脾虚痰浊证的研究,建立了巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型并进行了评价,在造模过程中,用于动物造模的小型猪跑步机获得国家发明专利。
(一)单因素造模法
1.饮食失节法
小鼠:对小鼠以高脂饲料(猪油32%、酪蛋白26%、麦芽糖糊16%、蔗糖9%、纤维素6%、其他成分11%)饲喂8周建立脾胃虚弱肥胖小鼠模型,并通过自主活动、旷场实验、每日进食量及粪便含水量筛选出符合脾虚痰浊证的小鼠。也有学者利用ApoE-/-基因缺陷小鼠饲以高脂饮食(脂肪21%,胆固醇0.15%),造模时间为8周,制备脾虚痰浊证小鼠模型。
大鼠:对大鼠饲喂高脂饲料(基础饲料55%,猪油15%,蔗糖20%,蛋黄粉9%,胆酸盐1%),每天自由摄入高脂饲料,饮水不限,连续喂养180天,得到脾虚痰浊大鼠模型。
兔:对白兔饲喂高脂饲料(高脂饲料配方为1.5%胆固醇,1%胆盐,3%猪油,3%花生油,5%蛋黄粉,加86.5%普通饲料),自由饮食,饮水不限,连续造模8周,得到脾虚痰浊模型。或给新西兰白兔一次性注射牛血清白蛋白(250 mg /kg),再以高脂饲料(胆固醇30%,猪油10%,脱氧胆酸钠2%,丙硫氧嘧啶2%),联系造模8周,得到脾虚痰浊模型。
巴马小猪:对小猪每日喂饲3%体质量的高脂饲料(配方:牛油10.0%、花生油6.0%、胆盐0.5%、3.0%胆固醇、2.5%安赛蜜、78.0%基础饲料)分别于8:00、16:00两次饲养,自由饮水,共喂饲24周,均可获得巴马小猪脾虚痰浊模型。
(二)多因素造模法
1.饮食不节、劳倦过度结合高脂饮食法
大鼠:①首先建立脾虚模型,采用不节饮食加游泳至力竭的造模方法:饱食1天,禁食2天,自由饮水;同时,每日放置大鼠于室温水中游泳至力竭,连续15天,制备脾虚模型;在脾虚模型的基础上予以高脂饲料饲喂,高脂饲料组成为基础饲料55%,猪油15%,蔗糖20%,蛋黄粉9%,胆酸盐1%,连续14周,期间自由摄食,饮水自由。②日常用高脂饲料喂养大鼠,饲料配比为:基础饲料83.3%、猪油10%、蔗糖5%、胆固醇1%、胆酸钠0.5%、甲硫氧嘧啶0.2%;使大鼠每日游泳至力竭;同时单日以精炼猪油3mL/只,2次/天灌胃,双日喂食不限量的甘蓝;连续造模30天可获得脾虚痰浊证大鼠模型。通过以上两种方法得到脾虚痰浊大鼠模型。
2.饮食不节、苦寒泻下结合劳倦过度法
大鼠单日禁食并以大黄水煎剂(1mL/100g,2次/d)灌胃,双日予以充足的高脂饲料(普通饲料53.6%、猪油10%、蔗糖15%、蛋白质20%、胆固醇1.2%、胆酸钠0.2%)并猪油(2mL/只)灌胃1次,每日令大鼠游泳至力竭,可建立脾虚痰湿大鼠模型。
3.劳逸失常结合高脂饮食法
猪:首先对巴马小型猪进行1周的适应性跑步训练,起始速度从0.8 km/h(跑步机的最小速度)起。训练1周后所有巴马小型猪表现为适应跑步,进入实验阶段,跑步过程中,在一定速度进入稳定跑态后,若稳定跑态的持续时间大于30秒,可增加0.3 km/h(或视情况增加0.3的倍数),直至冲刺到最大耐受速度为止,若不能进入稳态跑步或能进入稳态跑步但不能维持30秒,则根据实际情况适当减速;最终至巴马小型猪不能继续跑动,趴地喘息为止。同时使所有小猪均单笼饲养,并限制其活动,使大部分小猪不跑步时均处在卧位状态,使其过逸;每日喂饲小猪3%体质量的高脂饲料,高脂饲料配比为胆固醇3%,猪胆盐1%,花生油6%,猪油6%,基础饲料84%,使其饮食失节。饲料于每日8:00、16:00投放两次,自由饮水,造模周期24周(每周测量小猪体重,调整进食量),得到脾虚痰浊小猪模型。