从脾论治血脂异常与HDL亚类分布异常及失功能相关研究

（一）HDL亚类分布异常

朱美林等将60只大鼠用随机数字表法分为空白对照组、高脂血症模型组（模型组）、健脾降脂治疗组（治疗组）3组，每组20只。空白对照组予普通颗粒大鼠饲料喂养，其余两组采用高脂饲料造模法喂养，高脂饲料配方：8%花生油、1.5%胆固醇、0.4%甲基硫氧嘧啶、6%蔗糖、5%蛋黄粉、1%谷氨酸钠，以及78.1%基础饲料。造模30天后，空白对照组和模型组予生理盐水灌胃（20mL/kg），治疗组予健脾降脂中药（20mL/kg）1次/天灌胃，连续治疗30天。全自动生化分析仪检测血清TG、TC、HDL-C、LDL-C含量，HE染色观察肝脏形态变化，油红O染色观察肝脏脂质沉积，透射电镜观察肝脏组织超微结构变化。HDL亚类检测采用HDL颗粒检测试剂盒，经Lipoprint脂蛋白分类仪检测后，将HDL分为3类即大颗粒HDL、中等颗粒HDL及小颗粒HDL，检测结果分别以大颗粒HDL占HDL-C浓度百分比、中等颗粒HDL占HDL-C浓度百分比和小颗粒HDL占HDL-C浓度百分比表示。对HDL亚类的研究表明，与空白对照组相比，模型组血清大颗粒HDL含量降低，中颗粒HDL含量增加，提示高脂血症会影响血清HDL亚类的分布。HDL与AS负相关虽早已被证实，近年研究发现HDL对心血管的保护作用与HDL亚类在血浆中颗粒大小、相对含量密切相关，而且AS的成因可能是HDL的中小颗粒所导致。对HDL亚类的进一步研究发现，与模型组相比，治疗组血清大颗粒HDL含量增加，中颗粒HDL含量降低，提示健脾降脂中药可通过调节HDL亚类的异常分布，使高脂血症得到纠正。

（二）HDL失功能

陈丝等围绕香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠失功能高密度脂蛋白胆固醇（dyHDL）的影响开展了实验研究。其所在课题组前期研究认为脾虚状态可引起高脂血症大鼠血脂紊乱及肝脏脂质沉积，故选用健脾降浊法加以治疗，选用《古今名医方论·卷一》中具有益气健脾、理气和胃之功效的香砂六君子汤，以补脾益气之党参为主药，配伍白术、茯苓、炙甘草共达益气健脾之功，陈皮、木香、法半夏、砂仁行气化湿、燥湿化痰，诸药合用，可益气健脾、化湿降浊，尤善治疗脾胃虚弱所致的各种疾病。相关研究发现，血清中HDL-C是保护心脑血管疾病的主要因素之一，其保护机制与介导RCT，抗氧化及抗炎症等功能密切相关。而RCT是维持机体正常脂质代谢过程的重要环节之一，其功能正常与否将影响高脂血症的发生发展。因此，该研究通过观察香砂六君子汤调控脾虚高脂血症大鼠dyHDL的角度，探讨应用香砂六君子汤与改善脾虚高脂大鼠高脂状态的关系。

研究选用SD大鼠适应性喂养2周后，随机分为正常组，高脂组，脾虚高脂组，香砂六君子汤低、高剂量组，脾虚高脂组，香砂六君子汤低、高剂量组大鼠采用自由饮食加力竭游泳的复合方法（饱食1天，禁食2天，自由饮水）造模，根据《中医脾虚大鼠证候动物模型评价系统软件研究》《脾虚证动物模型的客观评估》对大鼠脾虚证进行评估，当大鼠出现游泳耐力下降、体质量减轻、食量减少、粪便时软时溏、倦怠懒动、毛色枯槁无光泽等表现时，证明脾气虚模型造模成功。15天后，正常组喂饲基础饲料，高脂组，脾虚高脂组及香砂六君子汤低、高剂量组喂饲高脂饲料（配方：10%猪油，1%胆固醇，0.5%胆酸钠，0.2%甲基硫氧嘧啶，5%蔗糖，加83.3%普通饲料）。造模成功后，灌胃给药，给药剂量按人和动物体表面积折算系数换算，香砂六君子汤低、高剂量组分别给予香砂六君子汤方药，给药剂量分别为5.67g/kg、11.34g/kg（以生药量计算），正常组、高脂组及脾虚高脂组给予相应体积的生理盐水。全自动生化分析仪检测血清TC，TG，LDL-C，HDL-C含量；ELISA检测血浆中PON1，apoA1，SAA含量；间苯三酚法测定D-木糖排泄率；肝脏组织病理形态学观察；Real-time PCR检测肝脏PON1，SAA，apoA1 mRNA水平。

HDL是血液中一种密度组成、颗粒大小及功能极不均一的脂蛋白，功能性HDL参与RCT，抗氧化，抗炎症，内皮细胞修复和抗血栓形成等过程。当机体受到环境、营养、糖尿病、吸烟等因素诱导时，将引发HDL失功能。研究发现，dyHDL可阻碍apoA1促进ATP结合盒转运体A1（ABCA1）所介导的RCT过程。RCT作为胆固醇主要代谢途径之一，可将胆固醇由外周转移至肝脏进行再利用和代谢，当其过程受到抑制时，胆固醇再利用和代谢水平降低，而机体内胆固醇水平升高，进而加剧机体脂质代谢紊乱，诱发或加重高脂血症的发生发展。apoA1作为RCT功能的主体，其表达水平可间接反映RCT水平，此外，apoA1还是HDL抗氧化活性的主要成分，可与HDL主要的抗氧化酶PON1结合，起到防止氧化脂质积累的作用。PON1是肝脏合成的，存在于HDL中的一种抗氧化性功能蛋白，是维持HDL结构完整性及功能的重要结构基础。同时，HDL对促进PON1的分泌及提供PON1功能所需的疏水环境有着重要的意义，由此可见，PON1与HDL有密切的生理联系。就抗炎症反应方面而言，SAA作为炎症最敏感标志物之一，在血浆中可替代apoA1与HDL-C结合，继而影响HDL-C功能，此外，SAA还可通过置换HDL上的apoA1抑制卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性，继而抑制胆固醇逆向转运。可见，高表达SAA可能是导致HDL失功能的主要原因之一。实验结果显示，与正常组比较，高脂组和脾虚高脂组大鼠血脂异常明显，肝细胞泡沫化严重，且脾虚高脂组大鼠结果较高脂组更严重。此外，脾虚高脂组大鼠尿D-木糖排泄率明显低于正常组，D-木糖排泄率降低是脾虚证的主要指标之一，因此说明脾虚高脂血症大鼠模型造模成功。ELISA结果显示，与正常组比较，高脂组和脾虚高脂组大鼠血浆apoA1，PON1表达水平显著降低，SAA表达显著升高，且脾虚高脂组血浆apoA1，SAA含量明显低于高脂组，说明脾虚条件对高脂血症大鼠HDL功能相关的RCT过程有一定的抑制作用，而对HDL功能相关的抗氧化过程有一定的缓解作用。Real-time PCR结果可知，与正常组比较，高脂组和脾虚高脂组apoA1，PON1 mRNA表达水平显著降低，SAA表达显著升高，且脾虚高脂组HDL功能相关mRNA表达降低较为明显，说明脾虚高脂血症大鼠血浆中HDL功能明显降低，而香砂六君子汤干预后，大鼠肝脏apoA1，PON1 mRNA表达显著升高，SAA mRNA表达显著降低，说明香砂六君子汤可纠正HDL失功能状态进而改善高脂血症疾病状态。且根据药物作用效果来看，香砂六君子汤不同剂量未见明显量效关系。提示香砂六君子汤可能通过调控脾虚高脂血症大鼠dyHDL进而改善其高脂状态。