束缚应激动物模型

三、束缚应激动物模型

1.实验原理·束缚刺激是实验医学最普遍应用的应激源。

（1）宽松束缚应激：限制动物自由活动，动物仍可进行部分活动。常用于采血、注射等非应激研究。对于啮齿类动物，常用塑料固定器或网篮作为工具，四肢不加捆绑（图14-4）。大型动物则常应用狭小笼子拘束。

（2）紧束缚应激：彻底限制动物活动。对啮齿类动物应用束缚衣、小尺寸固定器、捆缚四肢及头部固定于鼠板（俯卧位/仰卧位）等方法。

（3）束缚应激联合其他应激源：束缚应激合用低温、热、水浸、电击等其他应激源。

（4）束缚应激参数：束缚应激参数包括持续时间、束缚次数和频率。一般来说，束缚持续时间愈长、次数愈多、频率愈高，则应激强度愈大。但是要注意，长时间宽松束缚、次数增加、频率规律则有降低动物反应性的可能。

束缚应激对大鼠造成明显的行为变化，如排便、站立不动、尖叫、发出超声波、不断的淌泪、皮毛和面部不洁、毛须竖立、长期不动等。由应激导致一系列的生理变化，包括多种与应激有关的激素的释放。

2.实验方法

（1）主要实验仪器：束缚筒（图14-5）。

可利用50 mL塑料离心管或注射器自制束缚筒束缚小鼠。如由50 mL的注射器改装束缚筒，可将筒壁的不同部位钻若干通气的小孔，筒壁从尾向头剪一条5 mm宽、70 mm长的一条缺口，利于小鼠顺利进入筒内，缺口两侧加有铝片，以防止小鼠咬破缺口跑出束缚筒。

（2）实验分组设计及束缚应激处理

1）雄性C57BL小鼠，体重20 g共10只，随机分为应激组和对照组。

2）应激组小鼠置于束缚筒水平放置于饲养箱6 h/d，束缚应激21天，在此期间禁水禁食。应激结束后将动物仍放回原笼具中，此时可以自由饮水进食。

3）与此同时，对照组在实验中每天应激阶段仍待在原笼具中，但禁水、禁食。

4）在应激前，将各组动物称重，在21天应激阶段，各组动物每周均称体重。

5）21天束缚应激结束后，各组小鼠眶静脉取血，分离血清测定皮质酮浓度。

3.注意事项·在复制模型时，应调整动物的活动空间，以其不产生强烈的反抗、不会造成肉眼可见的躯体上的伤害为准，每天造模开始时间不固定，可增强心理应激的效果。

束缚工具也可以用加厚塑料袋制作简易束缚袋（图14-6），将塑料袋底尖端剪一圆孔，孔径宜小不宜大，以便小/大鼠呼吸而不能将嘴巴伸出。塑料袋口用线绳结扎于鼠尾根部。这种束缚袋每次固定时间应相应缩短。