四、中药毒理实验

为增加对中药毒性的了解，可在一定时期内，有针对性地研究中药的毒副作用，开展一般毒性和特殊毒性研究，确定中药的毒性表现和性质，确定靶器官和毒性的可逆性。虽然“三致试验”（致突变、致癌和致畸形）等特殊毒性研究会因实验条件和动物种别产生不同的结果，但是可作为临床应用的参考。比如，中药急性毒性试验方法通常包括半数致死量（median lethal dose，LD 50）法、最大耐受量（maximum tolerated dose，MTD）法和最大给药量（maximum feasible dose，MFD）法。LD 50法适合于毒性大的中药，动物实验一般采用口服、腹腔或静脉注射，挥发性成分也有采用吸入给药者。给药剂量一般设5～7个，组间剂量比为0.65～0.95，或按r＝n-1求得（r表示组间剂量比，n表示组数，b表示100%死亡剂量，a表示0%死亡剂量），每组动物至少10只。给药之后主要观察毒性反应、死亡率，并连续观察14 d，用Bliss法计算LD 50及95%的置信区间。MTD法适合于无法测出LD 50的中药的安全性评估，通常采用单次或24 h内多次给予动物最大浓度、最大用量的受试药物，观察动物是否出现中毒症状及其他病理变化。对于特殊毒性试验，常用的方法有Ames试验、一般生殖毒性试验、长期动物致癌试验等。MFD则多用于低毒药物。MFD是指以允许的单次给药或24 h内多次（2～3次）给药所采用的最大给药剂量。MTD和MFD的区别在于前者强调的是不引起受试动物死亡的最高剂量，而MFD检测结果可以是动物出现无明显毒性反应、有毒性反应甚至少数动物死亡。

对于中药的临床试验注册申请，需要遵守毒理研究GLP。GLP是“Good Laboratory Practice for Non-Clinical Laboratory Studies”或“Non-Clinical Good Laboratory Practice”的缩写，指“药物非临床研究实验室管理规范”，是申请药品注册所必须遵守的临床前研究规定。临床前研究的安全性评价，包括对正在开发的新药进行毒性试验，如单次给药毒性试验、反复给药毒性试验、遗传毒性试验、致畸试验、致癌试验、局部毒性试验、依赖性试验等。新药临床前的安全性评价，是临床研究的重要参考资料，也是评价该新药安全性的主要标准之一。GLP包括了硬件规定和软件规定两个方面。

1.GLP的软件规定　主要包括：实验机构的组织及人员资格的规定；质量保证部门（quality assurance unit，QAU）的设置；标准操作规程（standard operating procedure，SOP）的制定；供试物、对照物取样规定；制定实验计划、方案及实施的规定；实验报告及记录保存的规定等。

2.GLP的硬件规定　即设施及设备的规定，包括动物饲养、用品供给、取样设施、数据保管设施、实验操作区域等；还包括机器的规定如配备适合的测定仪器，环境净化机器设备，实验物品收集、解剖等方面的机器和仪器。

中药的GLP与西药的GLP有着相似之处。由于现代提取分离和分析技术的发展，中药中的化学成分正在被逐渐明确，于是沿用化学药物的GLP来研究中药的毒性和毒理逐渐成为可能。但是中药的GLP同样有其特殊性。中药成分复杂，其有效成分和毒性成分既可能是相同的成分，也可能是完全不同的成分，这为中药GLP的制定和实施增加了复杂性。另外，中药的毒性与其原药材的产地、采收期、储藏方法、药材批次相关，并受到药材炮制方法、药物配伍的影响，使得中药的GLP变得更加复杂。

中医的辨证论治、药物加减、配伍等理论作为中药毒理学研究的重要方面，尚有很多未知因素，亟须采用现代科学严密的实验研究方法提供证据。中药毒理学GLP的施行将为中药新药安全性评价和中药走向世界奠定基础。