程序化冷冻技术

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该方法主要是利用冷冻保护剂，将配子或胚胎进行缓慢冷冻，降温速率控制在0.2～0.8℃/min。该方法的优点是冷冻保护剂浓度低，对胚胎损伤小，冷冻效果好，复苏率高。但需要复杂的降温设备，冷冻时间比较长。目前，该方法是ART临床上应用最为广泛的卵裂期胚胎冷冻方法之一。Whittingham于1972年发明了此法，并首先应用于小鼠胚胎冷冻。随后，研究者将其优化并应用在人类胚胎冷冻。Trounson等在1983年首次利用慢速冷冻方法冻存8细胞期胚胎获得解冻妊娠。该方法的优点是冷冻保护剂浓度低对胚胎损伤小，冷冻效果好，复苏率高；缺点是需要复杂的降温设备和冷冻时间比较长。

随着胚胎低温冷冻技术的进一步发展和冷冻设备的升级，该冷冻方法得到了进一步的优化和改进，进一步缩短了冷冻的时间并加入了植冰这一关键步骤。改进后的方法又称程序冷冻法。其优点是：可以冷冻早期胚胎，这包括1～3 d的任何一个阶段的胚胎，冷冻的解冻复苏率和存活率达到70%～80%以上，并且在保证较高的胚胎冷冻复苏率的基础上使冷冻时间进一步缩短。目前，该方法是ART临床上应用最为广泛的卵裂期胚胎冷冻方法，解冻后的胚胎妊娠率可以达到40%～50%或更高。现在冷冻设备、冷冻试剂盒、冷冻仪器及冷冻程序等都有商业化生产，使得胚胎冷冻变的操作简单，冷冻效果稳定。

慢速解冻方法就是慢速冷冻方法的反向操作，即解冻以每分钟4～25℃的速率升温，使胚胎由冷冻温度缓慢升高至室温。