ICSI的主要步骤
（一）卵母细胞的准备
ICSI前卵母细胞的准备主要是去除颗粒细胞，具体步骤如下：
1.核对患者姓名。将已取出2～4 h的卵丘复合物吸入已预热的透明质酸酶皿中，巴氏吸管轻柔地反复吹打，以去除卵母细胞外围较多的卵丘和放射冠细胞，时间不超过30秒。
2.然后将卵母细胞移入去颗粒细胞皿中洗涤后，移入最后一个微滴，换用口径较细（如130μm左右）的巴氏吸管继续吹打，去除卵母细胞透明带上的颗粒细胞。
3.倒置显微镜下判断卵母细胞的成熟度。将MⅡ期卵母细胞移入清洗皿中清洗后放入孵育皿中，置于37℃、6%CO2的培养箱中培养至少2 h。
（二）ICSI的操作要点
首先要求显微操作人员要有耐心且细心，动作细致并能持之以恒，在付出大量时间与精力后，才能建立成功的显微操作系统，提高成功率。
1.调节操作针
将操作针降入ICS皿的PVP微滴中，调节倒置显微镜使操作针清晰可见，同时吸入少量PVP。旋转控制注射器的微调，调试注射针内液体的进出速度。将物镜切换至×20，同时调节显微镜和注射针，使微滴边缘和注射针清晰。(https://www.daowen.com)
2.精子制动与装载
将待注射的精子移至干净的PVP微滴中制动。制动方法：用注射针在精子尾部的中段或下段轻压，迅速回拉，使注射针划过精子尾部，使细胞膜破裂，精子制动；或注射针压住精子后，保持注射针的高度不变，左右移动使精子制动，在移动注射针的过程中可以观察到精子尾部轻微的打折。先尾后头将精子吸入显微注射针。
3.显微注射
将固定针降至放卵母细胞的G-MOPS微滴中，同时注射针轻拨动卵母细胞，使第一极体位于6～7点或11～12点处固定卵母细胞。换至高倍镜（200倍或400倍）下，调节固定针Z轴和显微镜焦距，直至卵膜最为清晰。然后调节注射针Z轴，将注射针尖调整到卵母细胞3点处，将精子推出距针尖10～20μm处，确认注射针、固定针内口及卵膜在同一平面后进针。穿刺卵膜近卵母细胞中间时，回吸少量卵胞质，当卵胞质开始快速吸入注射针时（表明卵膜已破），立即停止回吸，然后再将精子与回吸的卵胞质和尽量少的PVP一起注入卵胞质内，撤出注射针后检查精子是否在卵胞质内。如果发现精子在卵周间隙，则要重新注射。
4.退出操作针
退出注射针后，调节固定针负压释放卵母细胞，然后将固定针和注射针升高至液面上。将ICSI注射后的卵母细胞，移入受精皿中培养16～18 h后观察受精情况。
5.完成记录
记录卵母细胞质量、精子制动、注射方式和特殊现象等。
注：①不要用力过猛或反复多次制动，否则精子会黏附在培养皿底部使吸取精子困难，如果发生此类情况，应放弃该精子，重新选择精子并制动；②注射完毕观察卵膜是否回复正常位置，并观察精子注入的部位是否随卵膜的回复而至卵膜外，尽量减少进入卵母细胞中的PVP液；③显微注射技术熟练是ICSI成功的前提。卵母细胞在培养箱外暴露的时间越短越好。