三、培养液的pH

人类胚胎培养液的pH在胚胎不同发育阶段略有差异。人类卵裂期胚胎的pHi大约在7.1。胚胎的pHi不仅可调节氧化代谢和糖酵解过程的许多酶通路和反应，也调节细胞分裂、分化和细胞骨架的运动。卵裂期胚胎有特殊H＋和HCO3-离子膜转运系统，使胚胎可在一定范围内耐受pH的改变。在卵裂液中，pH应在7.20～7.25以避免胚胎应激。胚胎致密化后，胚胎外层的卵裂球扁平和紧密连接，随后发育为囊胚的滋养外胚层，形成囊胚腔液体的转运上皮细胞（TE）。TE不仅防止囊腔液体的渗漏，还可调节各种分子进出囊腔，因而使得囊胚调节自身pH稳定性的能力增强。囊胚发育过程中pH7.3～7.35。

目前用于胚胎培养的缓冲体系主要是碳酸盐/碳酸氢盐缓冲系统。培养液的pH主要靠碳酸氢钠和CO2的调节。该系统的pH随培养环境中CO2浓度而波动。测量培养液的pH意义远大于测量培养箱的CO2浓度。培养液的pH还受海拔、温度、通气时间长短，及培养箱是否经常开关等因素影响。如果培养液通气平衡时间不足，pH超过7.4，胚胎的形态和妊娠率都将受影响。另外，因尽量缩短胚胎在培养箱外的时间，避免pH波动对胚胎的影响。目前有部分商业化供应的培养液pH根据序贯培养液的要求而变化，也有部分商业化供应的培养液pH稳定不变。(https://www.daowen.com)

含有磷酸盐缓冲系统（PBS）的培养液受CO2浓度的影响小，曾被用于取卵和配制冷冻和解冻液，但磷酸盐的缓冲能力有限，且可能对胚胎发育有毒性。目前在大气环境中可以维持pH，故常被用于配子和胚胎体外操作的缓冲液有HEPES和3-吗啉丙磺酸（MOPS）两种。