卵裂期胚胎玻璃化冷冻的操作规程
1.提前30 min打开超净工作台，从冰箱中取出冷冻液，放置室温备用。
2.拉针：取出已消毒的无菌巴氏吸管在酒精灯上灼烧，然后煅烧拉细成约150μm的微吸管。
3.液氮准备：冷冻前准备一个泡沫盒，预先倒入适量的液氮，同时准备两根上端带有防冻保护的长柄镊子。取出相应位置的冷冻盒。
4.填写冷冻记录：由胚胎观察者负责挑选出需要进行玻璃化冷冻的胚胎并记录下冷冻日期、位置编号、管数和胚胎信息。
5.在胚胎冷冻与解冻登记本上填写患者夫妻双方姓名、冷冻时间、冷冻胚胎数目、麦管（冷冻管）编号、胚胎质量等。
6.打印冷冻标签：主要由胚胎观察者和胚胎评分录入者根据冷冻记录的内容来打印标签。标签上标明患者周期号、患者夫妻双方姓名、冷冻位置及管号、胚胎数和冷冻日期。核对者核对标签与冷冻单上信息是否一致确认无误后再打印交给冷冻岗。
7.胚胎冷冻：以加藤玻璃化冷冻液为例（所有操作在常温下进行）(https://www.daowen.com)
（1）冷冻者根据冷冻记录确定冷冻管数、胚胎数、冷冻胚胎序号，取出3002培养皿，吸取100μL平衡液（ES）滴于培养皿中做好冷冻液滴，将胚胎培养皿从培养箱取出，与核对者核对胚胎培养皿与冷冻管标签上的姓名是否一致。确认无误后取出准备好的吸管，装上吸头吸取胚胎放入ES液滴中，开始计时。在ES中停留5～8 min。期间在显微镜下观察胚胎缩涨的情况。操作者在冷冻记录上写上冷冻时间并签名。并且核对冷冻记录、冷冻标签是否出错。
（2）如果用载杆冷冻，吸取冷冻液（VS）100μL，分2～3液滴，在VS中不同液滴中吹吸2～3次，用巴氏吸管吸取胚胎连同不超过2μL VS，迅速转移到麦管尖端，投入无菌的液氮中，整个过程不超过60秒。在液氮中将麦管装好保护套，双人核对后再将其放到冷冻支架上，将冷冻支架投入液氮罐中保存。
（2）如用冷冻管冷冻，先用载体取样器吸住冷冻载体，将胚胎在VS不同液滴中吹吸2～3次，用巴氏吸管吸取胚胎连同不超过2μL VS，迅速转移到冷冻载体尖端，投入无菌的液氮中，整个过程不超过60秒。在液氮中将载体装好保护套，然后与核对者核对位置后将冷冻管放入冷冻盒相应位置中，最后把冷冻盒放入相应提筒位置中投入液氮保存。
8.操作者再次核对培养皿中培养液滴无继培和冷冻的胚胎和确认有废弃的胚胎。以确保挽救胚胎换液时的疏漏。将冷冻皿和吸管丢弃后才开始准备下一个人的冷冻。禁止同时冷冻两个患者的胚胎。
9.所有冷冻操作完后检查培养箱有无遗漏未冷冻的胚胎血，把冷冻液放回冰箱，操作和核对者在冷冻单上签名确认，把病历放回相应位置，上交完结病历并签名。
10.清理工作台面，关闭工作站。