囊胚玻璃化冷冻复苏
本方案使用的冷冻载体也为冷冻环。由于囊胚的细胞较小，而且相对表面积较大（多数细胞不呈球形），因此对渗透压变化耐受性更好，复苏可以从较低的蔗糖浓度开始。
（一）冷冻
1.器材
电子天平、移液泵、液氮容器、磁铁棒、止血钳。
2.耗材
15 mL离心管、巴氏吸管、无菌手套、60 mm内外池培养皿、铝制冷冻管架、冷冻环、0.22μm滤器、10 mL注射器、四孔板。
3.配制预备液
取7个15 mL离心管，分别写上A、B、C、D、E。
（1）A：HEPES缓冲的含蛋白HTF培养液10 mL。
（2）B：A＋蔗糖3.4 g。
（3）C：B+Ficoll 0.1 g。
（4）D：二甲基亚砜4 mL。
（5）E：乙二醇4 mL。
（6）B、C、E分别用0.22μm滤器过滤除菌。
4.人工皱缩
为了解决囊胚腔存在影响冷冻复苏效果的问题，对囊胚进行冷冻保存之前，应将囊胚的滋养细胞层穿刺后，使囊胚腔内液体流出囊胚腔塌陷，再进行冷冻，能够减少冷冻过程中形成冰晶的机会，显著改善囊胚冷冻后复苏的存活率，该过程称为囊胚的人工皱缩。
可以选择多种方法进行人工皱缩，包括机械法（透明带切割针、ICSI针、拉细的巴氏吸管、注射器针头等）和激光等手段。激光的方法操作较简便，对滋养细胞的损伤小。
（二）复苏(https://www.daowen.com)
1.配液与器皿准备
1）取出预备液A，B，取3个35 mm培养皿，分别写上1、2、3。按下述描述加液。
（1）1号加入A800μL。
（2）2号加入A800μL。
（3）3号加入A 800μL。
丢弃移液管。
取一个1 mL移液管，打开B管。
（1）1号加入B400μL。
（2）2号加入B200μL。
充分混匀1，2号培养皿。
2）将配制的液体37℃平衡。
2.复温与去冷冻保护剂
（1）在液氮中，用磁棒小心旋下冷冻环，空气中略停顿3～5秒。
（2）将冷冻环浸入培养皿1。停留2 min，轻柔吹吸数次。
（3）依次将胚胎移入培养皿2（停留3 min）、培养皿3（停留5 min），其间轻柔吹吸数次。
（4）转移入含囊胚培养液的液滴中培养2 h后移植。
（孙园园）