试剂及培养皿的准备
（一）试剂
1.透明质酸酶
早期常用的透明质酸酶源于动物（如牛），为减少潜在的疾病传播风险。现在已有商品化人重组透明质酸酶，通常浓度为80 IU/mL。
2.聚乙烯吡咯烷酮（PVP）
作为一种大分子物质，可使精子运动速度减慢便于选择和制动，方便ICSI操作，常用浓度有7%～10%。它是卵母细胞非自身固有的物质，可能发生不良影响。
3.其他培养液同常规体外受精。
（二）培养皿的制备
每个机构不完全相同，但是基本相似。以Vitrolife 试剂为例：
1.卵母细胞处理皿的制备（取卵前1 d）包括去颗粒细胞皿、清洗皿和孵育皿。(https://www.daowen.com)
（1）去颗粒细胞皿的制备：35 mm皿中有4个培养微滴，每个微滴有100μL的缓冲培养液（5%HSA＋G-MOPS），4.0 mL组织培养油覆盖后放入37℃、不通气培养箱中过夜平衡备用。
（2）清洗皿和孵育皿的制备相同：35 mm皿中有4个培养微滴，每个微滴有100μL的受精液（10%HSA＋G-IVF），4.0 mL组织培养油覆盖后放入37℃、6%CO2培养箱中过夜平衡备用。
2.ICSI准备皿的制备（取卵日上午）包括透明质酸酶皿、ICSI 皿。
（1）透明质酸酶皿：Falcon 353 001 皿中加入1 mL透明质酸酶，放入37℃、不通气的培养箱中预热2 h。
（2）ICSI皿的制备：吸取少量PVP在Falcon351 006皿中间做两条形微滴。如果是严重少、弱精或睾丸/附睾精子，则不用制作PVP微滴，直接将精子悬液制微滴。
然后在PVP周围用缓冲培养液（5%HSA＋G-MOPS）做小微滴（上方4个，下方3个，左右各1个），5.0 mL组织培养油覆盖后放入37℃、不通气的培养箱中预热2 h。
3.受精皿和胚胎生长皿的配制同常规体外受精。
注：①所有皿上都标记有患者姓名；②ICS皿的微滴不能靠近皿的边缘，因为皿的高度可能导致操作针无法下降至边缘的微滴位置；③尽可能缩短制作ICS皿的时间，因为微滴体积较小，极易因挥发而改变液体的渗透压。