二、脱去卵母细胞周围颗粒细胞
1.时间
脱去卵母细胞周围颗粒细胞,又称“剥卵”,是指用酶消化和机械剥离的办法将包围在卵母细胞外的颗粒细胞和放射冠剥离,使卵母细胞“裸露”出来的过程。可在取卵后1~2 h进行。在取卵过程中,卵母细胞可能因外界环境变化而受到应激。卵母细胞内部的微细结构需要时间来恢复正常,如某些关键蛋白的表达可能因体外操作而发生异常,但可在继续培养1 h后恢复正常,所以取卵后不应立即进行剥卵处理,应该预培养一段时间后再行剥卵,以免损伤卵母细胞,影响受精和随后的卵裂。同样道理,经过剥卵处理后,透明质酸酶卵母细胞也应培养至少1 h后再行ICSI授精。(https://www.daowen.com)
2.“剥卵”用皿准备取直径10 cm圆形培养皿,制作150μL左右的透明质酸酶微滴,及制备大小为50μL左右的配子体外操作液微滴,盖5~6 mL矿物油,放在37℃恒温操作台上。
(林晓潭)