睾丸穿刺精子处理标准操作规程

1.精液处理前一天每人配制4 mL和0.5 mLG-IVF液，分装入15 mL离心管和 5 mL圆底试管，放入37℃，6%CO2培养箱中平衡。

2.提前30 min 开启超净工作台，打开恒温加热台。

3.准备2根无菌巴氏吸管和两个1 mL注射器。

4.实验室人员在手术医生、护士的见证下核对患者信息。

5.睾丸穿刺前准备2个Falcon 3001皿，分别加入1 mL和0.2 mL G-MOPS液，将含1 mL G-MOPS液的Falcon 3001皿交给医生，手术医生将患者姓名写在皿盖上。(https://www.daowen.com)

6.睾丸穿刺：临床医生从睾丸中抽吸出1条或多条曲细精管放于盛有G-MOPS液的Falcon 3001皿中，由护士交给实验室。实验室人员将曲细精管至少洗涤一次后，移到另一个加入0.2 mL G-MOPS液的小皿中，在体视显微镜下，用两个注射器针头，一个压住组织的一端，一个向外分离睾丸组织，尽量将组织划开，让精子流出。在倒置显微镜下由低倍到高倍观察是否有精子。如精子数目足够（≥1条精子/2～3 HP），通知临床医生结束穿刺。如未发现精子或者精子数目不够，再进行穿刺。

7.将曲细精管用1 mL注射器完全磨碎后，再加入1 mL G-IVF液，放入37℃，6%CO2培养箱内孵育1～2 h。

8.然后将所有液体完全加入含4 mL G-IVF的离心管中，360 g离心10 min，离心后留约0.2 mL沉淀混匀，滴取少量液体在镜下观察并记录，剩余液体继续孵育。

9.实验室人员按情况填写睾丸精液处理表格，操作者和核对者签名。

（孙园园）