精液处理的标准操作规程
1.根据精液情况选择具体的精液处理方法。
2.精液处理前一天，每位患者准备两支15 mL锥形离心管和两支5 mL圆底试管，并分别贴上“IVF”“梯度液”“前”和“后”的带有患者姓名的标签。然后分装4 mL和1 mL G-IVF到“IVF”和“前”中，最后将4支离心管放入37℃，6%CO2培养箱中平衡。
3.精液处理当天，提前30 min 开启超净工作台。
4.分装1 mL 40%的梯度离心液PureCeption到“梯度液”离心管中，常温备用。
5.将精液样本及4根一次性巴氏吸管放置到对应的精液处理台面上，严格执行“一人一台”原则，按照患者姓名将梯度液分配到对应位置，核对者核对并确认分配正确，才可进行下一步操作。精液处理前，在40%的梯度离心管底部加入1 mL 80% 的梯度离心液Pure Ception。
6.精液取出后15～30 min，先用吸管检查精液是否完全液化，如果液化取10μL滴于载玻片上，盖上盖玻片，先在400×倍镜下观察并记录精液浓度、活力、活率，然后记录精液体积。如不液化或液化不全的精液，可以利用吸管机械吹打至精液完全液化，如果吹打后仍然不液化，需加适量G-IVF，然后吹打至完全液化，再进行常规分析和处理。
7.根据选择的方法，用准备好的试剂和耗材处理精液。
（一）梯度离心
1.将精液样本及4根一次性巴氏吸管放置到对应的精液处理台面上，严格执行“一人一台”原则，按照患者姓名将梯度液分配到对应位置，核对者核对并确认分配正确。
2.加入≤4.0 mL精液，如果精液体积＞4.0 mL而精子数较少时再多加一管梯度离心液分离精子。加精液时应慢慢沿着管壁滴入，与梯度液之间要有明显分层，避免精液与梯度离心液混合。
3.将等体积的平衡管放在相对应的离心机孔中，用360 g离心15 min。
4.离心过程中，分配IVF洗涤液与上游液管（前和后），核对者核对患者信息。
5.离心结束后用巴氏吸管弃去上层精浆和梯度液，留下最下层的精子沉淀约0.2 mL。(https://www.daowen.com)
6.用一根新巴氏吸管将精子沉淀转移到预平衡好的4 mL G-IVF的离心管中混匀，将离心管和平衡管配平，360 g离心5 min。 离心结束后吸去上清，留下最下层的精子沉淀约0.2 mL，打散混匀。
7.观察记录精子浓度、活率、活力等情况，松开盖子，放入37℃，6%CO2培养箱中孵育备用。
（二）梯度离心+洗涤后上游法
1.梯度离心步骤参考梯度离心的（1）～（6）获得精子沉淀约0.2 mL，打散混匀。
2.取出已经过夜预温的含1 mL G-IVF的圆底试管（前），将沉淀缓慢加入试管底部并松开盖子，45度角放入37℃，6%CO2培养箱中孵育15～30 min。
3.吸取圆底试管（前）上层液体约0.2 mL至圆底试管（后）中，观察并记录精液浓度、活率、活力等情况，松开盖子，放入37℃，6%CO2培养箱中孵育备用。
（三）离心洗涤法
1.用准备好的巴氏吸管，将精液与4 mL预温好的IVF放在15 mL离心管混匀，360 g离心15 min，去上清，留0.2 mL沉淀。
2.观察并记录精子浓度、活率、活力等情况，松开盖子，放入37℃，6%CO2培养箱中孵育备用。
（四）上游法
1.取出已经过夜预温的含1 mL G-IVF的圆底试管，用巴氏吸管将液化后的精液缓慢加入试管底部并松开盖子，45°放入37℃，6%CO2培养箱中孵育15～30 min。
2.吸取圆底试管（前）上层液体约0.2 mL至圆底试管（后）中，观察并记录精子浓度、活率、活力等情况，松开盖子，放入37℃，6%CO2培养箱中孵育备用。