人类胚胎体外培养液的选择

七、人类胚胎体外培养液的选择

目前商业化供应的胚胎培养液主要有两种:序贯培养液和单一培养液。虽然两种培养液的临床使用上未见明显差别,但序贯培养液的使用占主导。值得注意的是,培养液中有些成分并不是输卵管液特有的,如白蛋白和透明质酸;培养液中并非所有的成分都是必需的,如氨基酸;还有些成分如EDTA并非输卵管液成分。

(一)序贯培养液

如前所述,序贯培养液的设计基于以下几点:①着床前胚胎能量需求有改变,葡萄糖抑制卵裂期胚胎的发育;②EDTA通过影响3-磷酸甘油酸酯激酶活性抑制糖酵解,对囊胚和内细胞发育产生抑制作用;③L-谷氨酸经化学裂解产生氨,而氨的积聚对胚胎发育有影响;④早期胚胎发育过程中氨基酸的作用有变化,卵裂期胚胎需要非必需氨基酸,而囊胚则需要所有氨基酸,包括非必需和必需氨基酸。

序贯培养液包括受精液、卵裂液和囊胚液。在使用序贯培养液进行常规IVF时,需要在受精后D1和D3分别更换卵裂液和囊胚液。

(二)单一培养液

单一培养液在IVF的全过程中使用含有一种配伍的培养液。可选择全程不换液,使胚胎避免渗透压波动或其他应激的影响,一直不受干扰,并可保留胚胎自分泌和旁分泌的营养因子的作用,或者选择在受精后D3更换一次培养液。

针对序贯培养液的设计理念,单一培养液认为:①人类输卵管液中葡萄糖浓度0.5~3.15 mmol/L,应在培养液中添加葡萄糖至1.0~2.0 mmol/L;②EDTA的浓度可以降低至0.01 mmol/L,在不影响胚胎发育的同时,发挥克服2细胞阻滞的作用;③使用更稳定的双肽谷氨酸代替谷氨酸,减少氨的产生;④在氨基酸转换的研究中认为卵裂期胚胎净消耗的氨基酸均为必需氨基酸,而不是非必需氨基酸,而且目前对培养液中各个氨基酸的具体浓度缺乏数据支持。(https://www.daowen.com)

目前商业化供应的单一培养液有Global(ON),GM 501(Germany)和 SSM(CA)三种。

(三)培养液的临床应用

虽然两种培养液设计的理念有所差异,也各有所长,但目前的临床应用上并没有明显的差别,有可能与患者群体的复杂不孕病因、各个生殖中心的用药方案和实验室常规操作等都相关。

2013年,Basile等应用实时动态观察系统观察75个赠卵周期中单一培养液Global和序贯培养液 Quinne's Sage Cleavage 两种培养液培养下胚胎的发育情况,观察指标包括发育到2细胞、3细胞、4细胞和5细胞的时间,第2次细胞分裂的时间长度,及从2细胞发育到4细胞的同步性等,结果显示两种培养体系下胚胎发育的各个参数及胚胎植入率和临床妊娠率均无显著差异。

2013年,Mantikou等对1985年1月至2012年7月之间发表的22个关于不同培养液临床应用的研究进行系统回顾,但仅有4个研究包括活产率,9个研究有继续或(和)临床妊娠率。将所有数据汇总后,并未发现任何一种培养液的体系优于其他培养液。作者认为还需要更多随机对照临床研究来评估各种培养液的优劣。

(孙园园)