影响D3胚胎冷冻效果的因素
D3胚胎在冷冻解冻过程中，有一部分胚胎可能发生不可逆的损伤和死亡。即使是在良好的技术与实验室的高质量控制下，仍有一部分胚胎（10%～30%）可能在冷冻解冻的过程中发生卵裂球损坏导致无法移植。这与冷冻时胚胎的质量及胚胎处于的发育期有关。也可能还有其他未知因素影响着胚胎的冷冻复苏成活率、移植率和妊娠率。下面从实验室的角度来分析影响D3胚胎冷冻复苏效果的因素。
（一）胚胎自身因素
胚胎的质量好坏影响着胚胎的冷冻复苏率。Karlstrom等研究表明，在胚胎的冷冻前进行形态学分级，优级胚胎要比一般胚胎的抗冻和复苏损伤能力强、发育潜力好。胚胎的质量良好，解冻后的受孕率较高。Mandelbaum等也发现发育快的胚胎比发育慢的胚胎的冷冻复苏后的妊娠率和出生率要高。此外，胚胎卵裂球大小、均匀、碎片所占比例等因素也影响着胚胎的冷冻复苏效果。IVF与ICSI胚胎间对冷冻的承受能力没有差异。
（二）母体因素
母体年龄因素也影响着胚胎的质量和冷冻复苏率。有数据显示年龄大于35岁的患者胚胎存活率显著低于小于35岁人群，胚胎存活率与完整存活与年龄显著相关。Toner等发现，患者的年龄和基础FSH水平影响着解冻周期的成功率。Verberg等研究显示，卵巢储备功能好的患者可获得更多高质量的卵母细胞和胚胎。
（三）胚胎培养条件
胚胎培养条件大大提高了解冻周期的临床妊娠率。近几年来，胚胎培养液的优化和适宜的培养条件不但使新鲜的移植胚胎获得了较高的临床妊娠率，还改善了冷冻胚胎的质量和提高了冷冻胚胎的发育潜力。
（四）冷冻保护剂的选择
冷冻保护剂对胚胎及其发育有着一定的影响和毒性，其影响大小与其自身物理和化学性质有关，与其浓度和作用时间的不同而不同。不同发育阶段的胚胎细胞膜的通透性和对冷冻保护液的敏感性不同，因此，不同时期的胚胎需要不同的冷冻保护剂和相应的冷冻方案。冷冻保护剂的选择应该以高效、低度或无毒为原则。因此，应该了解和掌握胚胎冷冻保护剂的保护效果和毒性剂量，根据胚胎卵裂期的不同时间段，选择合适的冷冻保护剂。例如，D3胚胎常常用到PROH和蔗糖，囊胚及玻璃化冷冻常常用到DMSO和EG。
（五）冷冻和解冻的速度(https://www.daowen.com)
冰晶是造成胚胎冷冻和复苏损伤的最大因素之一。冷冻和解冻过程中，温度上升和下降的速率对胚胎有着显著的影响，因为细胞内的水在-30～-40℃这个温度区间内容易形成冰晶。在复苏的过程中也要经历这个温度区间。因此，避免大冰晶的形成和重结晶是胚胎冷冻复苏的关键步骤。
（六）冷冻方案和流程
胚胎卵裂期的不同时间段，胚胎细胞膜对冷冻保护剂的剂量和种类要求不同。因此冷冻方案的选择也不一样。D3卵裂期胚胎与D5囊胚冷冻要求就各不相同。
（七）技术因素
在冷冻过程中，胚胎需要在不同浓度的冷冻保护剂中平衡一段时间。这要求操作人员在从上一个液滴转移到下一个液滴，尽量少携带上一个液滴的液体；同时在同一个液滴中，要转移2～3个地点，以便胚胎获得充分的洗脱和平衡。所以，胚胎冷冻复苏操作人员应该经过充足的培训。
高效的植冰技术也很重要。植冰过大，容易造成胚胎温度剧烈降低来不及脱水而死亡。过短则达不到植冰的效果。所以在植冰时，要观察到植冰位置发白（冷冻麦管植冰0.3～0.5 cm为宜），植冰后几秒，植冰位置附近呈雾状为佳。
冷冻麦管存取的过程中尽量缩短暴露在空气中的时间，如果暴露时间过长，会导致麦管内液体复温、融化和反复冷冻，导致胚胎的损伤和死亡。所以在冷冻麦管存取时，要格外小心谨慎。此外，在培养液配制、胚胎操作、胚胎转移和设备维护方面进行高质量的质量控制，以减少人为对胚胎冷冻造成的影响。一套好的胚胎冷冻复苏质量控制体系是不可缺少的。
（八）其他因素
取卵前后的激素水平、不孕原因、精子质量、培养液、培养条件和促排卵药物等及其他位置因素是否影响胚胎冻存的效果，目前尚未有可靠的证据来证明。