精子冷冻保存中交叉污染的风险及防范

三、精子冷冻保存中交叉污染的风险及防范

目前并没有直接的证据表明冷冻保存的过程确实存在交叉污染,且尚无生殖中心报道使用冻存管或者麦管后发生交叉感染的事例。但是,有学者认为不能就此忽视了交叉污染存在的风险,它只是难以被估计,很难确定发生的可能性大小。既然已经有证据证明微生物确实能在液氮中存活,并且在一定条件下引起交叉污染,那么我们就该更加谨慎地对待精子的冷冻储藏及使用的过程。主要降低交叉污染的措施有:

1.冷冻载体的改进

Chen等提出使用一种热封口膜,覆盖在冻存管上,可以解决冻存管密封性不强,长期储存时液氮容易进入管内的问题,从而防止由于液氮引起的交叉污染,并且该方法无须改变目前的储存方式。Kuleshova等使用双层麦管来进行包装,使内部装有精液的麦管不直接接触液氮,减少由于液氮引起的交叉污染。有学者提议使用CBS的高安全性麦管系统。

2.使用隔离罐

在对供精志愿者的疾病检测结果出来以前,把精子保存在隔离罐中,包括对经过筛选的供精志愿者也是同样操作。只有被证明是“清洁”的样品才转移到长期储存罐中。有的精子库将新冻存的精液标本首先放在隔离罐,每3个月换一个罐,直到这个罐中所有的供精志愿者都是病毒检测阴性的,才将样品转移,如果有一个样品的病毒检测是阳性的,那么这个罐中所有的样品都必须废弃销毁,并且对该液氮罐进行消毒。这一方法非常谨慎和安全,但会造成有价值的精液的浪费,并且并不能完全避免其他途径造成的微生物污染。

3.使用气态氮进行标本存储

目前使用的冻存管长时间的在液氮中保存会导致液氮渗入冻存管中,不仅造成样品的污染,更容易在解冻时发生爆炸,造成对人的伤害。因此有观点认为样品直接储存在液氮液相中是不适合的,建议使用气态液氮储存罐或者保存在气液两相罐的气相中。(https://www.daowen.com)

4.对麦管外壁进行消毒

在用麦管或冻存管分装精子时,麦管的一端浸入精液中,造成麦管外壁的污染,进而在储存过程中污染液氮。Fountain等认为即使使用气态罐进行储存,麦管或冻存管的外壁仍会被液氮中存在的病原体污染。所以对解冻后麦管或冻存管的外壁进行消毒应作为精子库冷冻储存精液的一个标准操作程序。

5.对程序冷冻仪进行消毒

程序冷冻仪作为冷冻精子的仪器,在冷冻过程中同样存在交叉污染的危险,Fountain等认为程序冷冻仪并不是无菌的,液体和气态的液氮都会是潜在的微生物污染源,环境中存在的微生物会引起程序冷冻仪的轻度污染,曲霉菌则会引起程序冷冻仪的中度污染。除了对程序冷冻仪的内部进行消毒外,所有其他与样品进行接触的部件都要消毒。

6.解冻后的处理

有学者认为,虽然目前有很多种减少交叉污染的措施,如加入抗生素、灭活、酸化等,但对精子来说,用梯度离心法对精液的处理仍是一个既有效,又对精子损伤较小的方法。有研究提示梯度离心等精子洗涤方式对防止HIV及HCV的感染十分有效。