卵母细胞的慢速程序化冷冻

在辅助生殖技术中，冷冻卵母细胞并获得临床妊娠，慢速冷冻方法是常用方法之一。通常在程序化慢速冷冻的保护液中，含有细胞渗透性冷冻保护剂和非细胞渗透性保护剂。其冷冻前脱水过程与卵裂期胚胎程序化冷冻相似。在缓慢降温的过程中使细胞充分脱水，一般在-6～-8℃时植冰，-7℃为最佳植冰温度。植冰并停留1 min后，再以0.3℃/min速度待温度降至-35～-70℃后投入液氮中。对慢速冷冻液的研究中，PROH的浓度认识较一致，但对蔗糖的浓度，有学者认为适当地提高蔗糖的浓度对冷冻有利。有报道称把蔗糖浓度从0.1提高到0.3 mol/L后，卵母细胞的存活率从35%～40%提高到70%～75%。减少冷冻剂中钠的含量，或者采用不含钠的冷冻剂（1.5 mol/L丙二醇和0.1 mol/L蔗糖）能更有效地冷冻卵母细胞。抗冻剂能减少高盐浓液的损害。总之，找到细胞含水过多和过度脱水之间的平衡点，合适剂量的蔗糖等冷冻保护剂，及合适的冷冻速率，可以尽量避免由于经过冰晶形成和重结晶所造成的损伤。程序化冷冻卵母现在还有一部分的机制尚未弄清楚，如冷冻对微管、微丝、纺锤体及染色体的影响。MⅡ期纺锤体是一个高度动态的结构，对温度很敏感，超低温会对其产生影响。人卵母细胞在经历冷冻时，可能会发生纺锤体重建，微管微丝解体或消失，染色体的分散。有学者认为囊胚形成率、种植率和妊娠率不高可能是因为冷冻时损伤了卵母细胞骨架，特别是纺锤体结构。(https://www.daowen.com)

（孙园园）