玻璃化冷冻囊胚的解冻操作规程
1.培养液准备（以加藤解冻液为例）：解冻前1 d根据解冻胚胎人数分装解冻液T1，T2，T3，T4和G2培养液在14 mL圆底试管中。双人核对标记好分装日期和分装液体，每位患者需准备T1，T2，T3，T4各0.5 mL，G2 2 mL。分装好的T1盖紧放入37℃培养箱中，G2放入37℃，6%CO2培养箱中，分装好的T2，T3，T4放入冰箱。
2.解冻前一天下午写好解冻记录，注意以下几点：
3.提前30 min打开恒温操作台。
4.打电话给手术室前台核对当日手术计划上的患者是否到达，患者到达手术室前台报到后方可解冻胚胎。
5.解冻当天再次核对解冻计划和解冻小结以防写解冻记录的人出现疏漏和错误。
6.拉针：取出已消毒的无菌巴氏吸管在酒精灯上灼烧，然后煅烧拉细成约150μm的巴氏吸管。
7.准备液氮和需要解冻的囊胚：解冻前准备一个泡沫盒，并预先倒入适量的液氮，同时准备两根上端带有防冻保护的长柄镊子。双人核对在液氮罐中取出需要解冻的胚胎支架（冷冻管），放入液氮中，注意核对冷冻管所在位置与冷冻记录是否一致。
8.配制移植皿：在3037培养皿中加入前一天平衡过得G2 1 mL至中央井中，1 mL放入井皿外圈用来洗涤。
9.配制解冻微滴：提前拿出冰箱中的解冻液T2、T3和 T4在室温平衡30 min，在培养皿中分别做500μL T2、T3和T4微滴，置于室温。
10.解冻过程(https://www.daowen.com)
（1）从培养箱中拿出前一天准备的T1，在即将解冻胚胎前，在一单独培养皿中做500μL T1微滴，置于热台。
（2）按照解冻记录双人核对冷冻管（载杆）上的标签信息（冷冻日期，姓名，管数，胚胎数目），确认无误后将胚胎从液氮中取出，快速放于T1中，1 min。
（3）快速转移至T2中停留3 min。
（4）T2步骤时操作者在皿盖标明姓名、胚胎天数、胚胎个数，和核对者核对无误后，在解冻记录单上标明解冻时间。
（5）转移至T3中停留5 min。
（6）再转移至T4中停留5 min。
（7）将胚胎移入移植皿外圈洗涤3次以上，转移到移植皿中央井中，并放置于37℃，6%CO2，5% O2培养箱待用，在培养箱门相对应位置贴好标签。
11.记录和登记：填写解冻记录表，操作者和核对者签名确认。
12.在胚胎冷冻解冻登记本上查找患者名字、登记解冻时间、解冻胚胎数目、麦管数（冷冻管数）。
（孙园园）