Chelex-100提取法

当检验要求对DNA的模板质量要求不高时，可以用Chelex-100提取方法提取DNA。Chelex -100是一种化学螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成。含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，能螯合多价金属离子，尤其是选择性螯合二价离子，比普通离子交换剂具有更高的金属离子选择性和较强的结合力，能结合许多可能影响下一步分析的其他外源物质。通过结合金属离子，还可以防止DNA降解。通过离心除去Chelex颗粒，使这些与Chelex-100结合的物质与DNA分离，防止这些抑制剂或杂质带到PCR反应中，影响下一步的DNA分析。Chelex-100提取方法中，细胞DNA一直在同一管中进行操作，不涉及转移，因此检材的损失率低，是一个十分简单、快速的方法。但底物、核膜及其他试剂一起保留下来，DNA纯度比有机溶剂提取法低。Chelex-100方法将DNA双螺旋打开，不能用像EB染料插入方法进行定量分析，只能用杂交方法进行定量。Chelex-100法只适用于PCR分析，而不适合于RFLP分析，而且对于目的片段大于500bp的基因座的扩增成功率低。利用Chelex-100提取的DNA模板在复合扩增中存在各位点扩增不平衡的现象。

【基本步骤】

用无菌蒸馏水浸泡检材裂解细胞，通过离心收集沉淀，用浓度为5%的Chelex-100悬浮液悬浮沉淀中的细胞核，在56℃保温30min左右，剧烈振荡后，100℃保温8min，以裂解细胞核，释放DNA，同时使蛋白质变性成为不溶物，最后离心除去与金属离子结合的Chelex颗粒和其他非DNA成分（如蛋白质）。DNA留在上清液中，可直接用于随后的分析。56℃保温时向溶液中加蛋白酶K，可增加裂解的效率。

Chelex-100会随时间的延长被破坏，释放出以前结合的抑制物，因此用Chelex-100提取的DNA如果需要长期放置，应当把上清液与Chelex-100颗粒分开，保存在-20℃，以备以后分析。Chelex-100结合效果依赖于悬浮液pH值。5%Chelex-100的pH值在10.0～11.0为好。如果发现悬浮液的pH值不在此范围内，则应废弃。5%Chelex-100悬浮液最好现用现配，因为Chelex-100在数小时后螯合力有下降的趋向。