三、诊断
能早期、快速、准确、定量诊断CMV肺炎并及时给予抗病毒药物治疗可有效改善感染症状。降低病死率的主要问题在于区别潜伏性感染和活动性感染、是否有器官累及预测和判断治疗后复发等实验室技术。
（一）标本采集
1．血标本
取材简便，不需特殊器械，适用于ICH的CMV感染的筛查和监测。通过CMV血症的定量检测及快速培养等，可有效诊断活动性CMV感染。然而血中检测到CMV成分无定位意义，也不能排除是CMV感染基础上并发一般肺炎。对于无条件取得下呼吸道标本者，结合临床表现，血标本也可用于提示CMV肺炎诊断。血标本中以测外周血白细胞中的病毒成分最为敏感，其次为血浆，血清中病毒负荷最低。
2．下呼吸道标本
最主要和常用的采样方法为经纤维支气管镜支气管肺活检或支气管肺泡灌洗，偶采用经皮肺穿刺和开胸肺活检获取肺组织标本。检测肺活检标本或支气管肺泡灌洗液（BALF）中CMV包涵体、抗原、DNA、mRNA可明确肺部病毒存在与否和病毒的量。
（二）实验室诊断方法
1．经典检测方法
（1）直接检查人类CMV（HCMV）包涵体，即标本涂片或切片，染色后镜检，发现典型的嗜酸性核内包涵体的巨细胞。此法方便、快速，不需特殊设备，但不易见到典型的CMV感染细胞，有较高假阴性率，一次检查为阴性不能排除CMV感染，常需多次检查。
（2）应用电镜技术直接从检测标本中查找病毒颗粒，此方法由于技术复杂，设备昂贵，一般不适于临床常规检验。
（3）病毒分离培养，即将标本接种到人体成纤维细胞进行分离培养的方法。若得到CMV，可作为确诊的依据。有学者认为细胞培养是敏感性最高的诊断方法。但本法存在花费时间长，技术条件要求高，不能区别潜伏性感染和活动性感染，不能用于快速诊断等缺点。
2．早期抗原免疫荧光检查
此法是在传统的细胞培养基础上发展起来的，既有传统细胞培养的敏感性，又大大缩短了检测时间，能在16～40h内诊断CMV感染，适用于BAL中CMV的检测。本法另一个优点是能进行定量分析，一般以阳性细胞＜10个为低水平病毒血症，此时症状轻微，可作为抗病毒治疗起始或终止的指标；大于80个为高水平病毒血症，症状明显，需要治疗。
3．病毒抗原检测(https://www.daowen.com)
目前公认的、最常用的为检测外周血淋巴细胞pp65阳性细胞的数量。检测原理为应用单克隆抗体和CMV抗原特异性结合，通过免疫染色技术使标本中的被感染细胞直接显影。检测CMV抗原血症有可实现早期诊断、可定量分析、预测CMV肺炎的发生及预后、不需细胞培养、简便而不需特殊设备等优点。但在预测治疗后复发方面效果不佳。
4．CMV的DNA检测
（1）定性PCR：包括大部分的单一PCR。有学者认为用PCR检测BALF中CMV的DNA为最敏感的诊断CMV肺炎的方法，并且检测是否存在导致抵抗更昔洛韦等抗病毒药物的基因突变，可证实是否存在耐药株从而预测抗病毒药物疗效。但由于高度的敏感性，定性PCR不能区别潜伏性感染和活动性感染，减少循环次数可能降低假阳性率。为了降低不同CMV株基因变异导致的假阴性，可选用来自CMV高度保守区域的引物，加长被检测的DNA区域或选用多对引物进行复合PCR。
（2）定量PCR：潜伏性感染时CMV的DNA复制水平较低或在进行不完全基因扩增，而活动性感染时病毒DNA大量复制，对其进行定量分析可达到正确诊断CMV疾病的目的。有学者以定量PCR检测CMV的DNA来诊断41例肺移植术后患者并发CMV肺炎，敏感性、特异性高，阳性和阴性预测值分别为79%、99%、84%和99%，并且CMV的DNA量和疾病发展有良好的相关性，可用于预测CMV肺炎和监测抗病毒药物疗效。同时也发现CMV的DNA在以后发生复发性CMV疾病的患者中持续存在，故可用于治疗后复发的预测。
5．CMV的mRNA检测
在CMV潜伏性感染时，病毒复制水平低，仅转录少量CMV的mRNA，而在活动性感染，特别是免疫监视缺乏时，复制明显增多，CMV的mRNA的表达也随之增多。能够被检测到。即刻早期mRNA是活动性感染的最特异指标。CMV的mRNA在活动性感染前2～3周即呈阳性，有利于早期预测和防治。
检测技术主要有：①原位分子杂交，形态学定位好，操作简便，探针稳定性高，敏感性达100%，特异性达99%，并在小于5h内即可完成检测；②反转录PCR；③核酸序列扩增，能够直接等温扩增特异性单链RNA是本法的优点。
总之，检测CMV的mRNA阳性出现最早，敏感性和特异性均高，耗时少，能区别潜伏性感染和活动性感染，在CMV肺炎的监测及早期诊断方面有很好的应用前景。
6．CMV血清抗体检测
仅为CMV感染提供间接证据。抗CMV-IgM抗体出现较早，能帮助诊断。抗CMV-IgG抗体阳性仅能反映患者曾感染过CMV，若呈4倍或4倍以上增高诊断价值较高。由于血清抗体检测技术成熟，方便安全，有商品化试剂盒生产，故使用广泛。但存在敏感性较差，不适于早期诊断等缺点。免疫功能低下甚至缺失的患者，其抗体产生常受抑制，特异性抗CMV-IgM抗体在严重CMV感染中可始终不出现，因而血清学检查阴性不能除外CMV疾病，限制了其在ICH中的应用。
当前最广泛应用的定性并定量检测巨细胞病毒的方法有以下几种。
（1）病毒血症，可以通过测定基因型和表现型来确定血液中病毒的数量及耐药菌株。
（2）抗原血症，即检测外周血淋巴细胞pp65阳性细胞的数量。
（3）DNA血症，检测每升全血或血浆中病毒DNA复制的数量。