结直肠癌术后辅助治疗历史的时间线
（一）早期临床试验
早在20世纪50年代就已经开始了对结肠癌辅助治疗的探索，由于早期在辅助治疗中可以采用化疗药物及其疗效都颇为有限，而且在1950—1980年代中期进行的辅助治疗的临床研究，按照今天的标准评判都显得规模较小，因此难以从中得到明确的临床获益。直到1988年发表的一项荟萃分析表明，手术以后采用辅助化疗的患者，总生存期有延长的趋势，并且死亡风险的降低更偏向于术后治疗的患者，但是没有统计学的显著性差异。因此，当时的实际情况是需要进行一些大规模的临床研究来证实辅助治疗的切实获益。
（二）大规模临床研究的开始
第一项大规模开展结直肠癌辅助治疗临床试验的是NSABP-C01研究，该研究自1977年11月至1983年2月，共入选1166例Dukes B期和C期的结肠癌术后患者，患者随机分配到3个试验组之一：单独手术组、卡介苗（BCG）治疗组和MOF方案（司莫司汀、长春新碱和氟尿嘧啶）治疗组，结果显示在单独手术和BCG治疗组，没有明显的生存差异，但是MOF方案组和对照组相比，前者有更好的无病生存期（disease free survival，DFS）和总生存期（overall survival，OS）（P值分别为0.02和0.05），这项临床研究第一次证实了在可手术切除的局限期结肠癌患者，术后辅助化疗能够带来生存获益。
（三）氟尿嘧啶联合左旋咪唑(https://www.daowen.com)
左旋咪唑（levamisole，Lev）作为一种抗寄生虫药物，过去认为能够增强机体的免疫功能，因此在早期就被给予结肠癌术后的辅助治疗，20世纪80年代末期一些初步结果显示氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-FU）联合Lev能够改善结肠癌患者的术后生存，因此后续开展了一项大型的Ⅲ期确证性临床研究来证实5-FU联合Lev的疗效，即INT 0035研究。
INT 0035研究是一项Ⅲ期随机对照的大型临床试验，共人选1296名患者，其中Ⅲ期患者为929名，Ⅱ期患者为318名，随机分配到单独手术、术后给予1年的5-FU联合Lev以及术后1年单纯给予Lev 3个治疗组，结果显示Ⅲ期患者术后不给予任何治疗的5年生存率为44%，而5-FU联合Lev组为61%，在单纯给予Lev治疗的患者没有任何治疗效应。随访6.5年，5-FU联合Lev组能够降低33%的死亡机会以及40%的复发率（P值分别为0.007和0.001）。故此这项研究的意义在于确定了结肠癌术后淋巴结阳性的Ⅲ期患者辅助化疗的地位，在没有任何医学或者心理禁忌证情况下，应该将术后辅助化疗作为此类患者的标准治疗。
（四）氟尿嘧啶联合亚叶酸
转移性结直肠癌患者证明亚叶酸（leucovorin，Lv）和5-FU联合应用能够起到生化调节的作用，随之也开始了对结肠癌辅助治疗的两药联合研究。至少有两项大型研究回答了对此问题的探索。第一项研究是Ⅲ期随机对照的NSABP C-03研究，承接了在C-01研究中证实最优的联合化疗组MOF方案对比5-FU联合进行生化调节的LV。该研究纳入了1081例Dukes B期和C期患者，随机接受MOF方案或者5-FU联合LV治疗。结果显示3年总生存5-FU/LV组优于MOF方案组（P=0.003），3年的DFS率也显示出5-FU/LV组更优（73% vs 64%；P=0.000 4）。另一项大型研究是国际多中心结肠癌试验汇集分析（International Multicenter of Colon Cancer Trials，IMPACT），旨在评价Ⅱ期和Ⅲ期结肠癌中5-FU/LV辅助治疗的有效性。此研究汇集了3个几乎相同的采用5-FU 370—400mg/m2联合LV 200mg/m2，连用1—5天，28天重复、共6周期方案的临床试验，最终来自1493例患者的研究数据显示，在Dukes C期患者，术后接受5-FU/LV联合治疗，3年无事件生存率为62%，而单独手术组为44%。因此这两项研究也证实了LV/5-FU的辅助化疗能够延长生存。
有鉴于此，5-FU联合LV是有效的术后辅助化疗方案，而5-FU联合Lev在之前的研究也显示出辅助治疗的意义，到底何种方案是这类患者的优选方案呢？NSABP C-04研究入组2 151例结肠癌术后Dukes B期和c期患者，随机分配到周方案5-FU/高剂量LV、相同的5-FU/LV方案联合Lev以及5-FU+Lev 3组，所有患者接受为期1年的治疗。5年DFS在5-FU/LV组为65%，而在5-FU/左旋眯唑组为60%（P＝0.04），5年OS也示出5-FU/LV组有优于5-FU/Lev组的趋势：但是P值无统计学意义，此外，在5-FU/LV基础上加用Lev未显示出任何临床获益。
因此通过上述临床研究，逐步证实了辅助化疗对局限性结肠癌根治术后能够带来生存获益，此外也显示了LV能够对5-FU进行生化调节，5-FU/LV和5-FU/Lev相比，前者能够进一步提高疗效，延长患者生存。因此，在之后的临床实践中，5-FU联合LV成为Ⅲ期结肠癌患者术后的标准辅助化疗方案，直至出现了三药联合方案，改变了临床实践。